4.常見的物理消毒滅菌方法(物理消毒,常用的物理消毒滅菌法)
1.物理消毒,常用的物理消毒滅菌法有哪些
物理消毒法是利用物理因素作用于病原微生物將之殺滅或清除的方法.物理因素按其在消毒中的作用可分為五類：（1）具有良好滅菌作用的，如熱力、微波、紅外線、電離國徽等，它殺滅微生物的能力很強(qiáng)，可達(dá)來滅菌要求；（2）具有一定消毒作用的，如紫外線、超聲波等，可殺滅絕大部分微生物；（3）具有自然凈化作用的如寒冷、冰凍、干燥等，它們殺滅微生物的能力有限；（4）具有除菌作用的，如機(jī)械清除、通風(fēng)與過濾除菌等，可將微生物從傳染媒介物上去掉；（5）具有輔助作用的，如真空、磁力、壓力等，雖對(duì)微生物無傷害作用，但能為殺滅、抑制或清除微生物創(chuàng)造有利條件.。
2.常用的消毒滅菌方法有哪些
(1)加熱滅菌法 利用高溫來殺死微生物（超過最高生長溫度）的方法。
加熱滅菌的原理：當(dāng)高溫作用于微生物時(shí)，首先引起細(xì)胞內(nèi)生理生化反應(yīng)速率加快，機(jī)體內(nèi)對(duì)溫度敏感的物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核酸等，隨著溫度的增高而遭受不可逆的破壞，盡而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)體的變化、酶結(jié)構(gòu)的破壞，從而使細(xì)胞失去了生活機(jī)能上的協(xié)調(diào)，停止了生長發(fā)育。隨著高溫的繼續(xù)作用，細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)便發(fā)生凝固，酶結(jié)構(gòu)完全破壞，活動(dòng)消失，生化反應(yīng)停止，滲透交換等新陳代謝活動(dòng)消失，細(xì)胞死亡。
加熱滅菌可分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。 1）干熱滅菌 利用灼燒或干熱空氣滅菌而沒有飽和水蒸氣參加的滅菌法稱為干熱滅菌法。
由于干熱滅菌使用方便，方法簡單，故在生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。如火焰滅菌法：直接利用火焰把微生物燒死，故又稱焚燒滅菌法。
采用此法滅菌既徹底又迅速，但只適用于金屬制的接種工具、試管口及污染物品等的處理。熱空氣滅菌法：即在電熱恒溫干燥箱中利用干熱空氣來滅菌。
2）濕熱滅菌 即利用蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。濕熱滅菌又分為高壓、常壓、間歇滅菌和巴氏滅菌4種。
①高壓蒸汽滅菌 由于高壓蒸汽具有較強(qiáng)的穿透力和較常壓高的溫度，能大大縮短滅菌時(shí)間，提高工作效率，加之蛋白質(zhì)在濕熱條件下容易變性，在熱蒸汽條件下，細(xì)菌的芽孢在120℃，經(jīng)20~30分鐘可全部被殺死。如滅菌材料體積較大，不易被穿透時(shí)，可將壓力增加到0.152兆帕，延長至1~2小時(shí)。
在高壓蒸汽滅菌中，滅菌溫度隨蒸汽壓力的增加而升高（圖2-6）。 圖2-6 高壓蒸汽滅菌鍋 在使用高壓滅菌鍋時(shí)，要完全排出鍋內(nèi)的空氣而以飽和蒸汽代之。
如果空氣不排除干凈，則鍋內(nèi)溫度將低于同樣壓力下由純飽和蒸汽產(chǎn)生的溫度，影響滅菌效果。 此法適用于各種耐熱物品的滅菌，如一般培養(yǎng)基、生理鹽水等各種溶液、玻璃器皿、工作服等。
所采用的蒸汽壓力與時(shí)間，應(yīng)根據(jù)待滅菌物品的性質(zhì)、體積與容器類型等決定。 ②常壓蒸汽滅菌 這是采用自然壓力、100℃蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。
它設(shè)備簡單、成本低，當(dāng)前使用最廣泛。只要砌一個(gè)爐灶，買1~2只大鍋，上面用磚和水泥砌成，也可用大鐵桶、木桶等，體積大小可自行決定，但不宜過大，以裝800~1500瓶為好。
設(shè)計(jì)常壓灶時(shí)應(yīng)注意的問題：大小根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來定，灶頂部最好制成拱圓形，這樣冷凝水可沿灶的內(nèi)壁下流而不會(huì)打濕棉塞；灶倉內(nèi)要有層架結(jié)構(gòu)，以便分層裝入滅菌物；灶上應(yīng)安裝溫度計(jì)，可隨時(shí)觀察灶內(nèi)溫度的變化；因滅菌時(shí)間長，鍋內(nèi)水不夠蒸發(fā)，故容量大的灶要安裝加水裝置；灶倉的密閉程度要盡可能高，這樣既提高滅菌效果，又節(jié)省燃料。菇農(nóng)在生產(chǎn)中還常用一種小型蒸汽發(fā)生裝置，引出蒸汽后直接通到下邊用木條塹起、四周用多層塑料布密封的菌袋堆中進(jìn)行常壓滅菌。
這種方法不用建灶，簡便省工（圖2-7）。常壓滅菌一般水燒開后保持8~10小時(shí)，悶一夜即可。
圖2-7 簡易常壓滅菌法 ③常壓間歇蒸汽滅菌法 這是利用常壓蒸汽反復(fù)幾次滅菌的方法。具體做法是將待滅菌物品放在鍋內(nèi)，100℃處理1小時(shí)左右，殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞，讓其冷卻至30℃左右，此時(shí)芽胞會(huì)萌發(fā)，再以同樣方法加熱處理，反復(fù)3次，可達(dá)到滅菌目的。
該方法可用于不耐高溫的藥品、營養(yǎng)物、特殊培養(yǎng)基的滅菌。 ④低溫巴氏滅菌法 即在60~70℃下，經(jīng)一定時(shí)間，殺死有害微生物的方法。
適應(yīng)于不耐高溫的物品消毒。有些培養(yǎng)基，在高溫下遭到破壞，用此法既可殺死致病微生物的營養(yǎng)體，又能使培養(yǎng)基的成分不致受到嚴(yán)重破壞。
食用菌生產(chǎn)中培養(yǎng)料堆積發(fā)酵工藝，就是利用這個(gè)原理殺死其中的病蟲、雜菌。 （2）過濾除菌法 又分液體過濾和空氣過濾兩種，就是采用機(jī)械的方法，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子，做成各種過濾器，通過機(jī)械過濾，只讓液體培養(yǎng)基或空氣從篩孔流出，各種微生物菌體則留在篩子上，從而達(dá)到除菌的目的。
這種方法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基（如動(dòng)物血清、蛋白質(zhì)、酶、維生素等）及氣體的滅菌。超凈工作臺(tái)的工作原理就是將帶菌空氣通過過濾滅菌形成無菌空氣，從風(fēng)洞中吹出，來造成工作臺(tái)范圍的無菌狀態(tài)。
過濾滅菌的最大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。常用的過濾器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉膠、硝化纖維素濾膜制成的。
（3）輻射滅菌法 利用輻射產(chǎn)生的能量進(jìn)行殺菌的方法稱輻射滅菌。輻射可分電離輻射和非電離輻射兩種，α-射線、β-射線、γ-射線、X-射線、中子和質(zhì)子、微波等屬電離輻射，紫外線、臭氧、日光為非電離輻射。
1）紫外線滅菌 紫外線殺菌的原理是利用紫外線的輻射作用。用燈管直接照射細(xì)菌使其發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，將細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)誘導(dǎo)形成胸腺嘧啶雙聚體，從而抑制DNA的復(fù)制而發(fā)生變性、致死。
另一方面，空氣在紫外線照射下產(chǎn)生的臭氧（O3），也具有一定的殺菌作用。紫外線的有效作用距離為1.2~2.0米。
紫外燈一般懸吊在接種室或培養(yǎng)室的上方，個(gè)數(shù)依房間大小而定，容1~2個(gè)人操作的接種室，安裝一個(gè)30瓦的紫外燈就可以了。在每次接種前，應(yīng)將所需的器具一起放入接種室（箱）內(nèi)，然后打開紫外燈照射。
如果接種室體積較大，開燈照射2小時(shí)。
3.物理滅菌有哪幾種方法
物理消毒就是利用物理的作用（包括光、熱、蒸汽、壓力等）以殺滅病原體。
在養(yǎng)蠶生產(chǎn)中應(yīng)用較廣泛的物理消毒法有蒸汽消毒、煮沸消毒及日光消毒等。
(1)蒸汽消毒及蒸煮消毒
消毒方法與作用原理：濕熱條件下利用高溫（100℃）使病原蛋白質(zhì)變性、凝固而失去致病力。消毒對(duì)象及使用范圍：蒸汽消毒時(shí)加入少量的甲醛效果更好。蠶網(wǎng)、蠶蔟等零星的小蠶具可通過蒸煮消毒。
(2)日光消毒
作用原理：利用日光中的紫外線來殺菌。紫外線是一種波長0.32~0.40微米左右的短波光線，殺菌力強(qiáng)。紫外線照射后引起核酸、蛋白質(zhì)變性而失去致病力，此外，日光的紅外線有熱輻射作用，使病原微生物表面發(fā)熱干燥，能起到一定的輔助消毒作用。日光消毒的效果與物體表面溫度的高低關(guān)系很大，如溫度越高則照射的時(shí)間可適當(dāng)縮短。
消毒對(duì)象及使用范圍：日光消毒的對(duì)象比較廣泛，對(duì)各種病原微生物都有殺滅的作用。但由于只能消毒表面層，不能深入內(nèi)部，且受大氣的影響較大，日照的強(qiáng)度亦無法掌握。因此，只能作為蠶具的輔助消毒。在日光消毒時(shí)要注意做到將蠶具攤平，使之充分曝曬于直射日光之下，并要經(jīng)常調(diào)換正反面或多曬幾次。
