索氏提取法測(cè)定脂肪的(索氏提取發(fā)測(cè)定中需注意哪些問(wèn)題)
1.索氏提取發(fā)測(cè)定中需注意哪些問(wèn)題
一是樣品加入量的控制。
固體樣品：準(zhǔn)確稱(chēng)取均勻樣品2g~5g（精確至0.01mg），必要時(shí)拌以海砂，全部移入濾紙筒內(nèi)。
液體或半固體：準(zhǔn)確稱(chēng)取均勻樣品5g~10g（精確至0.01mg），置于蒸發(fā)皿中，加入海砂約20g，攪勻后于沸水浴上蒸干，然后在95℃~105℃時(shí)干燥。研細(xì)后全部轉(zhuǎn)入濾紙筒內(nèi)，蒸發(fā)皿及附有試樣的玻璃棒，均用沾有乙醚的脫脂棉擦凈所用器皿，并將棉花也放入濾紙筒內(nèi)，減少誤差。樣品應(yīng)干燥后研細(xì)，裝樣品的濾紙筒一定要緊密，不能往外漏樣品；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不能接觸明火。
二是樣品的抽提及試劑的選擇。
索氏抽提器一定安裝在溫度72℃的水浴鍋里面。在抽提器冷凝管上端放一脫脂棉球，以防水分進(jìn)入和乙醚或石油醚的揮發(fā)。抽提時(shí)將濾紙筒放入索氏脂肪抽提器的抽提管內(nèi)，連接已干燥至恒重的接收瓶，由抽提器上端加入無(wú)水乙醚或石油醚至接收瓶?jī)?nèi)容積的三分之二處，于72℃左右水浴上加熱回流抽提，控制虹吸速度為每小時(shí)20次左右，一般抽提（6~12）小時(shí)。
無(wú)水乙醚的加入。樣品含水量較低時(shí)可選用無(wú)水乙醚作為溶劑，樣品含水量高s時(shí)只能選擇石油醚做溶劑；在干燥器中的冷卻時(shí)間一般要一致。
石油醚的加入。選擇石油醚作為溶劑，因?yàn)檠跖c水能形成氫鍵使穿透組織能力降低，使乙醚抽提能力下降；石油醚溶解脂肪的能力雖然比乙醚弱些，但吸收水分比乙醚少，使用時(shí)允許樣品含有微量水分，沒(méi)有膠溶現(xiàn)象。
2.索氏提取中使用乙醚作脂肪提取溶劑時(shí),應(yīng)該注意的事項(xiàng)有哪些?為什
注意事項(xiàng)：
1、脂肪提取器是利用溶劑回流和虹吸原理，使固體物質(zhì)連續(xù)不斷地為純?nèi)軇┧腿〉膬x器。溶劑沸騰時(shí)，其蒸氣通過(guò)側(cè)管上升，被冷凝管冷凝成液體，滴入套筒中，浸潤(rùn)固體物質(zhì)，使之溶于溶劑中，當(dāng)套筒內(nèi)溶劑液面超過(guò)虹吸管的最高處時(shí)，即發(fā)生虹吸，回入燒瓶中。通過(guò)反復(fù)的回流和虹吸，從而將固體物質(zhì)富集在燒瓶中。 脂肪提取器為配套儀器，其任一部件損壞將會(huì)導(dǎo)致整套儀器的報(bào)廢，特別是虹吸管極易折斷，所以在安裝儀器和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中須特別小心。
2、用濾紙包試樣粉末時(shí)要嚴(yán)實(shí)，防止試樣粉末漏出堵塞虹吸管；濾紙包大小要合適，既能緊貼套管內(nèi)壁，又能方便取放，且其高度不能超出虹吸管高度否則將會(huì)影響虹吸。
3、升華過(guò)程中要控制好溫度（本次實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟）。若溫度太低，升華速度較慢，耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)；若溫度太高，會(huì)使產(chǎn)物發(fā)黃（分解），影響產(chǎn)率。
4、升華時(shí)候的溫度太高，注意，千萬(wàn)小心不要被燙傷。
3.索氏抽提法的注意事項(xiàng)
測(cè)定用樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都需要進(jìn)行脫水處理。
試樣粗細(xì)度要適宜。
索氏抽提法測(cè)定脂肪最大的不足是耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)，如能將樣品先回流1~2次，然后浸泡在溶劑中過(guò)夜，次日再繼續(xù)抽提，則可明顯縮短抽提時(shí)間。
YG-Ⅱ型油分測(cè)定器容量大，適合于樣品較多的選種鑒定工作使用，溫度控制在70℃左右，8h可提取完畢。
必須十分注意乙醚的安全使用。
乙醚中過(guò)氧化物的檢查方法是：取適量乙醚，加入碘化鉀溶液，用力搖動(dòng)，放置1min，若出現(xiàn)黃色則表明存在過(guò)氧化物，應(yīng)進(jìn)行處理后方可使用。處理的方法是：將乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗滌2~3次，以除去乙醇；然后用鹽酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振搖，靜置，分層后棄去下層水溶液，以除去過(guò)氧化物；最后用水洗至中性，用無(wú)水CaCl2或無(wú)水Na2SO4脫水，并進(jìn)行重蒸餾。
4.索氏抽提法的細(xì)節(jié)解析
如何利用殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗
殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗脂肪含量，是用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑（乙醚或石油醚）回流抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘?jiān)亓恐睿瑏?lái)計(jì)算粗脂肪含量。
測(cè)定過(guò)程中為什么需要對(duì)樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都要進(jìn)行脫水處理？
進(jìn)行脫水處理的原因有三：第一，抽提體系中有水，會(huì)使樣品中的水溶性物質(zhì)溶出，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高；第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約2%的水），從而影響抽提效率；第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細(xì)胞組織內(nèi)部，結(jié)果不易將脂肪抽提干凈。
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中安全使用乙醚應(yīng)注意哪些問(wèn)題？
抽提室內(nèi)嚴(yán)禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得含有過(guò)氧化物，保持抽提室內(nèi)良好通風(fēng)，以防燃爆。
測(cè)定樣品粒子粗細(xì)有什么要求？
試樣粗細(xì)度要適宜。試樣粉末過(guò)粗，脂肪不易抽提干凈；試樣粉末過(guò)細(xì)，則有可能透過(guò)濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測(cè)定結(jié)果。
5.索氏提取器法操作要點(diǎn)
索氏提取法，又名連續(xù)提取法、索氏抽提法，是從固體物質(zhì)中萃取化合物的一種方法。索氏提取法，用于粗脂肪含量的測(cè)定。脂肪廣泛存在于許多植物的種子和果實(shí)中，測(cè)定脂肪的含量，可以作為鑒別其品質(zhì)優(yōu)劣的一個(gè)指標(biāo)。目前國(guó)內(nèi)外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公認(rèn)的經(jīng)典方法，也是我國(guó)糧油分折首選的標(biāo)準(zhǔn)方法。此法花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，在實(shí)驗(yàn)室多采用脂肪提取器（索氏提取器）來(lái)提取。
索氏提取器法操作要點(diǎn)：
1、如何利用殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗脂肪含量？
殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗脂肪含量，是用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑（乙醚或石油醚）回流抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘?jiān)亓恐睿瑏?lái)計(jì)算粗脂肪含量。
2、測(cè)定過(guò)程中為什么需要對(duì)樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都要進(jìn)行脫水處理？
第一，抽提體系中有水，會(huì)使樣品中的水溶性物質(zhì)溶出，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高；第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約2%的水），從而影響抽提效率；第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細(xì)胞組織內(nèi)部，結(jié)果不易將脂肪抽提干凈。
3、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中安全使用乙醚應(yīng)注意哪些問(wèn)題？
抽提室內(nèi)嚴(yán)禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得含有過(guò)氧化物，保持抽提室內(nèi)良好通風(fēng)，以防燃爆。
4、測(cè)定樣品粒子粗細(xì)有什么要求？
試樣粗細(xì)度要適宜。試樣粉末過(guò)粗，脂肪不易抽提干凈；試樣粉末過(guò)細(xì)，則有可能透過(guò)濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測(cè)定結(jié)果。
6.索氏提取法食品脂肪質(zhì)量時(shí)如何判斷抽提是否完全
索氏抽提取器是由回流冷凝管、提脂管、提脂燒瓶三部分所組成，抽提脂肪之前應(yīng)將各部分洗滌干凈并干燥，提脂燒瓶需烘干并稱(chēng)至恒量④抽提將濾紙筒放入索氏抽提器中，連接已干燥至恒重的脂肪接收瓶，由冷凝管上端加入無(wú)水乙醚或石油醚至接收瓶體積的2/3，在水浴上加熱，使乙醚或石油醚不斷的回流，一般抽提6~8h，至抽提完全為止。控制每分鐘滴下乙醚80滴左右（夏天約控制65，冬天約控制80），⑤稱(chēng)量取下接收瓶，回收乙醚或石油醚，待接收瓶?jī)?nèi)乙醚剩1~2ml時(shí)，在水浴上蒸干，再于100℃±5℃干燥2h，取出放干燥器內(nèi)冷卻30min，稱(chēng)重，并反復(fù)操作至恒重。2簡(jiǎn)要敘述索氏提取法應(yīng)注意的問(wèn)題？簡(jiǎn)要敘述索氏提取法應(yīng)注意的問(wèn)題？答：1）樣品應(yīng)干燥后研細(xì)，樣品含水分會(huì)影響溶劑提取效果，而且溶劑會(huì)吸收樣品中的水分造成非脂成分溶出。裝樣品的濾紙筒一定要嚴(yán)密，不能往外漏樣品，也但不要包得太賢影響溶劑滲透。放入濾紙筒時(shí)高度不要超過(guò)回流彎管，否則超過(guò)彎管的樣品中的脂肪不能提盡，造成誤差。2）對(duì)含多量糖及糊精的樣品，要先以冷水使糖及糊精溶解，經(jīng)過(guò)濾除去，將殘?jiān)B同濾紙一起烘干，再一起放入抽提管中。3）抽提用的乙醚或石油醚要求無(wú)水、無(wú)醇、無(wú)過(guò)氧化物，揮發(fā)殘?jiān)康汀Ｒ蛩痛伎蓪?dǎo)致水溶性物質(zhì)溶解，如水溶性鹽類(lèi)、糖類(lèi)等，使得測(cè)定結(jié)果偏高。過(guò)氧化物會(huì)導(dǎo)致脂肪氧化，在烘干時(shí)也有引起爆炸的危險(xiǎn)。4）提取時(shí)水浴溫度不可過(guò)高，以每分鐘從冷凝管滴下80滴左右，每小時(shí)回流6—12次為宜，提取過(guò)程應(yīng)注意防火。5）在抽提時(shí)，冷凝管上端最好連接一個(gè)氯化鈣干燥管，這樣，可防止空氣中水分進(jìn)入，也可避免乙醚揮發(fā)在空氣中，如無(wú)此裝置可塞一團(tuán)干燥的脫脂棉球。6）抽提是否完全，可憑經(jīng)驗(yàn)，也可用濾紙或毛玻璃檢查，由抽提管下口滴下的乙醚滴在濾紙或毛玻璃上，揮發(fā)后不留下油跡表明已抽提完全。7）在揮發(fā)乙醚或石油醚時(shí)，切忌用直接火加熱，應(yīng)該用電熱套，電水浴等。烘前應(yīng)驅(qū)除全部殘余的乙醚，因乙醚稍有殘留，放入烘箱時(shí)，有發(fā)生爆炸的危險(xiǎn)。8）反復(fù)加熱會(huì)因脂類(lèi)氧化而增重。重量增加時(shí)，以增重前的重量作為恒重。9）因?yàn)橐颐咽锹樽韯⒁馐覂?nèi)通風(fēng)。3如何判斷索氏提取法的提取物的干燥恒重值？如何判斷索氏提取法的提取物的干燥恒重值？恒重是指前后兩次稱(chēng)量的質(zhì)量之差在0.3mg以下，通常需要在烘箱中烘烤約30min，反復(fù)加熱會(huì)因脂肪的氧化而增重，質(zhì)量增加時(shí)，以增重的質(zhì)量為恒重。4食用油酸價(jià)，堿價(jià)，過(guò)氧化值，羰基價(jià)的定義？食用油酸價(jià)，堿價(jià)，過(guò)氧化值，羰基價(jià)的定義？答：酸價(jià)指中和每克油脂所消耗氫氧化鉀的毫克數(shù)，表示油脂中的游離脂肪酸的含量或油脂發(fā)生酸敗的程度。過(guò)氧化值：氧化碘化鉀的物質(zhì)的量，以每千克中活性氧毫摩爾量（或毫克當(dāng)量）表示，表示油脂中過(guò)氧化物的含量及油脂被氧化的程度。羰基價(jià)脂類(lèi)被氧化所生成的過(guò)氧化物，進(jìn)一步分解為含羰基的化合物，由此產(chǎn)生的化合物的量或相當(dāng)數(shù)值為羰基價(jià)，其大小代表油脂氧化變質(zhì)的程度。第九章蛋白質(zhì)的測(cè)定1請(qǐng)簡(jiǎn)述凱氏定氮法消化過(guò)程中的操作步驟？請(qǐng)簡(jiǎn)述凱氏定氮法消化過(guò)程中的操作步驟？
準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的樣品，加入硫酸銅0.5g、硫酸鉀10g和濃硫酸20mL、玻璃珠數(shù)粒→小心移入干燥潔凈的500ml凱氏燒瓶中（固體或粉末用紙卷成紙筒送入），輕輕搖勻，以45？斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上→用電爐以小火加熱（或先燒瓶
放在距電爐較遠(yuǎn)處），待內(nèi)容物全部炭化、泡沫停止產(chǎn)生后→加大火力（或?qū)糠旁陔姞t上），保持瓶?jī)?nèi)液體微沸→至液體變藍(lán)綠色透明后→繼續(xù)加熱微沸30min→關(guān)閉電爐，取下燒瓶、冷卻→轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加水定容
2簡(jiǎn)述凱氏定氮法的基本原理？簡(jiǎn)述凱氏定氮法的基本原理？樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。然后取消化液的全部加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。3凱氏定氮法操作中應(yīng)注意那些問(wèn)題？凱氏定氮法操作中應(yīng)注意那些問(wèn)題？答：（1）試劑溶液應(yīng)用無(wú)氨蒸餾水配制（2）消化時(shí)不要用強(qiáng)火，應(yīng)保持緩和沸騰，消化中不時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)凱氏燒瓶，以便冷凝酸液洗下附在瓶壁上的固體殘?jiān)龠M(jìn)其消化完全。（3）為加速消化，常加入硫酸鉀提高消化體系溶液溫度，硫酸銅催化劑、消化終點(diǎn)指
