菌種保藏主要的方法(保藏菌種的方法)

1.保藏菌種的方法有哪些

1、傳代培養(yǎng)保藏法：包括又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等，培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時間。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物。

5、冷凍干燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥），其中真空冷凍干燥法最常見。

擴(kuò)展資料

菌種保藏的原理：

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運(yùn)用一些方式盡量降低生物體內(nèi)的代謝，達(dá)到延長生命，減少變異的目的。通常采用的方法為低溫、缺氧、干燥。

低溫主要對菌種產(chǎn)生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機(jī)體細(xì)胞的酶活，降低新陳代謝，達(dá)到保藏菌種的目的。其次，低溫同時會導(dǎo)致菌體誘發(fā)菌絲自溶機(jī)制，如果降溫過程失誤，同樣會造成機(jī)體的機(jī)械損傷和溶質(zhì)損傷。

參考資料來源：百度百科——菌種保藏

2.常用的菌種保存方法有哪些

菌種保藏是食用菌產(chǎn)業(yè)的一項基礎(chǔ)工作，是確保野生種質(zhì)資源基因留存和現(xiàn)有生產(chǎn)用種遺傳性能相對穩(wěn)定的必要手段。

菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。在生產(chǎn)實(shí)踐中，更需要設(shè)備投入少，能保障菌種不死亡、不污染、最大限度地保持優(yōu)良種性的簡便方法，如斜面低溫短期保藏和自然基質(zhì)較長期保藏相結(jié)合的方法。

一般而言，對母種進(jìn)行長期保存，對原種進(jìn)行短期保存。須保證優(yōu)良菌種的性狀和活力不發(fā)生變異，不死亡，不被污染，確保其純度。

因此，保存方法應(yīng)具備取材容易、操作方便、菌種不易退化、長期保存不污染雜菌等優(yōu)點(diǎn)。常用的菌種保存方法如下：（一）斜面低溫保藏 該法的優(yōu)點(diǎn)是保藏方便且所占空間較小。

具體做法是：菌絲長滿斜面后，放在0~5℃保存。以后每隔一定時間（2~3個月）轉(zhuǎn)管一次。

轉(zhuǎn)管保存不能長期用PDA培養(yǎng)基，否則種性易退化，灰樹花降解木質(zhì)纖維素的能力減弱。因此隔一定時間（1年左右）須把菌種轉(zhuǎn)接到木屑培養(yǎng)基上復(fù)壯，之后挑選健壯無污染的菌絲再轉(zhuǎn)回PDA培養(yǎng)基保存。

在長期保存過程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。菌種試管口最好用蠟燙封，以防培養(yǎng)基內(nèi)水分過快蒸發(fā)。

增加瓊脂用量（2.5%~3%）可減緩水分蒸發(fā)。還要防止菌種管上的標(biāo)簽脫落而造成種系混雜。

斜面低溫保藏方法簡便易行，能隨時觀察保藏菌株的活力和純度，一旦染雜，肉眼能及時發(fā)現(xiàn)。（二）自然基質(zhì)保藏 此法是根據(jù)灰樹花的特性，利用自然基質(zhì)保藏其菌種的方法。

灰樹花是木腐菌，可以采用以木屑為主料的培養(yǎng)基。自然基質(zhì)營養(yǎng)全面，且大部為緩釋養(yǎng)分，不易產(chǎn)生營養(yǎng)過剩或饑餓；其次，培養(yǎng)基理化性狀好，可吸收或緩沖菌絲代謝出的有害物質(zhì)，水分與通氣協(xié)調(diào)平衡，部分菌絲扎入基質(zhì)內(nèi)生長，不裸露于空氣中，菌絲呼吸強(qiáng)度低，生命力強(qiáng)。

1.原料與配方 粗、細(xì)木屑比例適當(dāng)，采用板栗樹木屑最佳，粗木屑粒徑為2毫米左右，細(xì)木屑為一般圓盤鋸屑，粗、細(xì)的比例為1∶2，添加干木屑重量20%的麩皮和1%的糖，含水率為60%左右。這樣的基質(zhì)通氣性好，營養(yǎng)豐富且供菌絲分解利用的時間長，長到基質(zhì)內(nèi)部的菌絲比包裹在基質(zhì)外部暴露于空氣中的菌絲耐受性強(qiáng)。

不同粒徑的基質(zhì)比例適當(dāng)，還能協(xié)調(diào)氣與水的矛盾。粗粒過多，架空菌絲多；細(xì)粒過多，透氣性差，菌絲生長慢。

應(yīng)用配方如下：栗木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，裝入較粗大的試管中，裝料量為試管的1/3~1/2,1.5千克/厘米2滅菌1.5小時。冷卻后，接入需保藏的菌種，在28℃下培養(yǎng)，待菌絲長滿木屑培養(yǎng)基時取出換上無菌橡皮塞，在0~5℃冰箱內(nèi)保藏1~2年轉(zhuǎn)管一次。

2.容器與裝量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗潔凈，裝量一般不超過玻璃瓶容量的3/5，填料不能過滿，瓶壁所殘留的顆粒須擦拭干凈，否則保藏的菌種易引起污染。3.滅菌和冷藏 滅菌時若采用棉塞封口，基質(zhì)表層易失水，接種成活率低，即使菌絲復(fù)活，生長也很緩慢，所以最好采用聚丙烯膜封口，接種后換用無菌棉塞培養(yǎng)，待菌絲長滿后再換成有孔滅菌膠塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌種經(jīng)3年貯放后，接出成活率均達(dá)90%以上，出菇驗證產(chǎn)量及子實(shí)體形態(tài)特征均無明顯變化。因此，自然基質(zhì)保藏法具有保存期長，菌種遺傳性能相對穩(wěn)定的特點(diǎn)。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰樹花在自然狀態(tài)下易發(fā)生于栗樹根部，這說明其營養(yǎng)需求較為特殊。根據(jù)灰樹花這種習(xí)性，在PDA基礎(chǔ)上添加適量的栗樹木粒制成母種培養(yǎng)基。

在多年的使用中發(fā)現(xiàn)，用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的母種生長勢好，在轉(zhuǎn)接原種時，適應(yīng)能力強(qiáng)，萌發(fā)定植快；用作菌種保藏基質(zhì)時，保藏時間長，并能很好保持菌種的優(yōu)良性狀。1.木粒PDA的制作 選取栗樹邊材，加工成0.3~0.5厘米的顆粒，及時烘干或曬干備用。

稱取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成營養(yǎng)液。將營養(yǎng)液倒入盛有木粒的小鋁鍋中，營養(yǎng)液以完全浸沒木粒為準(zhǔn)。

煮沸10分鐘，以加快木粒對營養(yǎng)液的吸收速度，起鍋靜置30分鐘讓木粒吸足營養(yǎng)液。撈出木粒，瀝掉表面的水，裝入試管，裝量為試管長的1/6，最多不得超過試管長的1/5，否則在擺制斜面時，不易使木粒均勻分散于斜面的表面上。

選取新鮮的馬鈴薯，去皮并切成薄片，稱取200克放入小鋁鍋中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁熱過濾取汁，并補(bǔ)足1升的體積。稱取瓊脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。

先將瓊脂剪碎，加入到馬鈴薯濾液中，繼續(xù)用文火加熱，使瓊脂溶化。待瓊脂完全溶化后，加入稱好的其他3種營養(yǎng)成分，攪拌使這些物質(zhì)溶解均勻，趁熱裝入已裝有木粒的試管中，裝至試管長的1/3處，塞上棉塞。

在0.8~1千克/厘米2蒸氣壓下滅菌40分，待氣壓降至0時，開蓋取出，趁熱輕輕抖拍試管，使木粒分散后即可擺制斜面，并使木粒呈半裸狀分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培養(yǎng)基。2.生長及保藏效果 木粒PDA斜面上培養(yǎng)的灰樹花母種，菌絲生長迅速、良好，12天即可長滿試管，但菌絲的后期生長勢更為粗壯、濃密，后勁足。

轉(zhuǎn)接原種時，菌種適應(yīng)力強(qiáng)，定植快。這表明，灰樹花菌絲的生長速度、生長勢不僅取決于本身的遺。

3.菌種的保藏有哪些方法

為了保持菌種的純凈，常需要進(jìn)行 菌種的保藏。

菌種的保藏分為臨時保藏 和長期保藏。 1. 臨時保藏 臨時保藏常用于頻繁使用的菌種。

首先將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng) 基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長 大后，將試管放入4 °c的冰箱中保藏。

以后每3?6個月，都要重新將菌種從舊 的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。不 過此方法保存時間不長，菌種容易被污 染或產(chǎn)生變異。

2. 長期保藏 長期保藏常用于需要長期保存的菌 種，采用的是甘油管藏的方法。在3 mL 的甘油瓶中，裝入lmL甘油后滅菌。

將 1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘 油充分混合均勻后，放在一20 °C的冷凍 箱中保存。

4.食用菌的菌種有哪些保藏方法

(1)斜面低溫保藏。是一種最常用、最簡便的菌種保藏方法。首先將需要保藏的菌種接到斜面培養(yǎng)基上，在適宜的溫度條下培養(yǎng)，當(dāng)菌絲健壯地長滿斜面時，即將此試管菌種取出，放置于4 ℃的冰箱中保藏。特點(diǎn)：

①簡單易行，適用于各類菇類菌種保藏，是目前生產(chǎn)及科研普遍采用的一種方法；②保藏時間短，需6個月轉(zhuǎn)接一次，轉(zhuǎn)管次數(shù)多菌絲變異的可能性大；③如改用橡皮塞并用石蠟扣，可保藏1年~3年。

(2)液體石蠟保藏。液體石蠟保藏也稱為礦油保藏，即用礦油覆蓋試管斜面試管保藏的方法。礦油是指無色、透明、黏稠、性質(zhì)穩(wěn)定、不易被微生物分解的石蠟油和液體石蠟，將其覆蓋在斜面菌種之上，可以隔絕空氣，防治培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，抑制微生物的代謝活動，推遲細(xì)胞老化，從而達(dá)到長期保藏菌種的目的。特點(diǎn)：

①方法簡便易行，保藏條件不嚴(yán)格，保藏時間長，可作為長期保藏菌種的方法；②菌種必須垂直放，放置不方便。

(3)濾紙保藏。濾紙保藏是一種以無菌濾紙作為食用菌孢子吸附載體長期保藏菌種的方法，又稱濾紙孢子保藏法。特點(diǎn)：技術(shù)要求高，設(shè)備費(fèi)用大，菌種不易衰老退化，菌種保藏時間長很少變異。

(4)自然基質(zhì)保藏。自然基質(zhì)保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含營養(yǎng)的自然生長的基質(zhì)作培養(yǎng)基來保藏菌種的方法。自然基質(zhì)很多，食用菌常用的自然基質(zhì)有發(fā)酵的糞草、木屑及枝條基質(zhì)等，取材方便，制作方法簡便，保藏時間也較長。使用時，只需取一塊、一?；蛞粭l培養(yǎng)物放在新鮮的培養(yǎng)基上，并在適溫下培養(yǎng)即可。特點(diǎn)：方法簡便易行，保藏時間長。

5.菌種保藏方法有哪些

菌種保藏方法很多，常用的有繼代培養(yǎng)低溫保藏、液體石蠟覆蓋保藏、蒸餾水覆蓋低溫保藏、超低溫冰箱保藏和液氮超低溫凍結(jié)保藏。

（1）繼代培養(yǎng)低溫保藏：將菌種放在4℃?6℃恒溫箱中保藏3?6個月，然后重新進(jìn)行移接，移接后再放回恒溫箱繼續(xù)保藏。此法是目前普遍采用的方法，優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用儀器設(shè)備簡單，操作方便，簡便易行。

缺點(diǎn)是菌種退化快，較長時間保藏后常出現(xiàn)菌絲生長緩慢，甚至不能生長現(xiàn)象，有的品種還會形成色素。 （2）液體石蠟覆蓋保藏：將無菌的液體石蠟覆蓋于菌種斜面表面，隔絕菌種的氧氣供應(yīng)，以控制生長，減緩老化，減少變異。

此法有時會出現(xiàn)大量分泌色素、發(fā)生角變、菌絲變稀變?nèi)?、生長不正常等問題。 （3）蒸餾水覆蓋低溫保藏：將無菌蒸餾水注入需保藏菌種的斜面菌種內(nèi)，然后把菌袋（瓶）直立放置于4℃?6℃恒溫箱保藏。

此法常被用作菌種的短期保藏，1年左右需要繼代培養(yǎng)1次。 （4）超低溫冰箱保藏：此法需要超低溫冰箱，溫度控制在-76℃?-80℃，可以長期保藏。

（5）液氮超低溫凍結(jié)保藏：此法是將菌種置于保護(hù)劑中，經(jīng)程序降溫至-90℃，將菌種置于液氮容器中長期保藏。

6.菌種保藏的目的、原理及常用的方法有哪些

菌種保藏方法大全 基本原理 微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個因素而設(shè)計的。 保藏方法大致可分為以下幾種： 1.傳代培養(yǎng)保藏法 又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。

2.液體石蠟覆蓋保藏法 是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。3.載體保藏法 是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4.寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5.冷凍保藏法 可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6.冷凍干燥保藏法 先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。

有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。

保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。 三、器材 細(xì)菌、酵母菌，放線菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黃土或紅土，冰塊、食鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無水氯化鈣； 滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5*1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。

四、操作步驟、各保藏法的應(yīng)用范圍及優(yōu)缺點(diǎn) 下列各法可根據(jù)實(shí)驗室具體條件與需要選做。 1.斜面低溫保藏法 將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏時間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌保存2—4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細(xì)菌最好每月移種一次。

此法為實(shí)驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異，因為培養(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機(jī)會亦較多。

2.液體石蠟保藏法 （1）將液體石蠟分裝于三角燒瓶內(nèi)，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用。 （2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子。

（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)（圖Ⅶ-12），使菌種與空氣隔絕。 （4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）。

此法實(shí)用而效果好。霉菌、放線菌、芽孢細(xì)菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無芽孢細(xì)菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內(nèi)，亦可保藏3個月之久。

此法的優(yōu)點(diǎn)是制作簡單，不需特殊設(shè)備，且不需經(jīng)常移種。缺點(diǎn)是保存時必須直立放置，所占位置較大，同時也不便攜帶。

從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應(yīng)特別注意。 3.濾紙保藏法 （1）將濾紙剪成0.5*1.2cm的小條，裝入0.6*8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘。

（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長。 （3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 （5）將安瓿管放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

（6）將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。 （7）需要使用菌種，復(fù)活培養(yǎng)時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。

細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設(shè)備。

4.沙土保藏法 。