常用的色譜方法(常用的色譜定量方法)

1.有哪些常用的色譜定量方法

色譜分析常用的定量方法：歸一化法、內(nèi)標(biāo)法和內(nèi)加（增量）內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法。

1、面積歸一化法優(yōu)點(diǎn)是簡便、準(zhǔn)確，當(dāng)操作條件變化時對結(jié)果影響較小，宜于分析多組分試樣中各組分的含量。但是試樣中所有組分必須全部出峰，因此，此法在使用中受到一定限制。

2、外標(biāo)法是用純物質(zhì)配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（或直接購買不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液）分別取一定體積，注入色譜儀，根據(jù)峰面積和濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。在分析未知樣時按與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的操作條件和方法，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出所需組分的濃度（現(xiàn)在在工作站上直接就能求出濃度）。

此法要求進(jìn)樣準(zhǔn)確，操作條件穩(wěn)定，分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線條件必須一致。 3、內(nèi)標(biāo)法是試樣中所有組分不能全部出峰或只要求測定試樣中某個或某幾個組分時，可采用此法。

內(nèi)標(biāo)法是在準(zhǔn)確稱取一定量的試樣中，加入一定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（內(nèi)標(biāo)物），根據(jù)內(nèi)標(biāo)物和試樣的質(zhì)量以及色譜圖上的相應(yīng)峰面積，計(jì)算待測組分的含量。內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是試樣中不存在的純物質(zhì)，物質(zhì)與被測物質(zhì)相近，能溶于樣品中，但不能于樣品發(fā)生反應(yīng)。

此法比較費(fèi)事，一般不使用于快速分析。

2.有哪些常用的色譜定量方法

色譜定量方法比較2006年12月20日

星期三

15:31定量分析常用術(shù)語：

樣品（sample）含有帶測物，供色譜分析的溶液。分為標(biāo)樣和未知樣。

標(biāo)樣（standard）濃度已知的純品。

未知樣（unknow）濃度待測的混合物。

樣品量（sample

weight）待測樣品的原始稱樣量。

稀釋度（dilution）未知樣的稀釋倍數(shù)。

組分（componance）欲做定量分析的色譜峰，即含量未知的被測物。

組分的量（amount）被測物質(zhì)的含量（或濃度）。

積分（integerity）由計(jì)算機(jī)對色譜峰進(jìn)行的峰面積測量的計(jì)算過程。

校正曲線（calibration

curve）組分含量對響應(yīng)值的線性曲線，由已知量的標(biāo)準(zhǔn)物建立，用于測定待測物的未知含量。

常用的定量方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法，分為外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。

外標(biāo)法在液相色譜中用的最多。

內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確但是麻煩，在標(biāo)準(zhǔn)方法中用的最多。

外標(biāo)法

用被測化合物的純品作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制成一系列的已知濃度的標(biāo)樣。

注入色譜柱的到其響應(yīng)值（峰面積）。

在一定范圍內(nèi)，標(biāo)樣的濃度與響應(yīng)值之間存在較好的線性關(guān)系，即W=f*A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

在完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下，注入未知樣品，得到欲測組分的響應(yīng)值。

根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測組分的濃度

外標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)：

操作、計(jì)算簡單，是一種常用的定量方法。

無需各組分都被檢出、洗脫。

需要標(biāo)樣。

標(biāo)樣及未知樣品的測定條件要一致。

進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確。

外標(biāo)法缺點(diǎn)：

實(shí)驗(yàn)條件要求高，如檢測器的靈敏度，流速、流動相組成的不能發(fā)生變化；每次進(jìn)樣體積要有好的重復(fù)性。

內(nèi)標(biāo)法

操作：

將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品，制成混合標(biāo)樣，并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣?；旌蠘?biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。

注入色譜柱，以（標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積）為響應(yīng)值。

根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系，即W=f*A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品，注入色譜柱，得到欲測組分的響應(yīng)值。

根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測組分的濃度

內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn)：

操作過程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的，因此只要混合溶液中被測組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值恒定，上樣體積的變化不會影響影響定量結(jié)果。

內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積，乃至流動相、檢測器的影響，因此比外標(biāo)法精確。

3.常見的色譜分離方法有哪些

常見的色譜分離方法有哪些

液相色譜按分離機(jī)理分為吸附、分配、交換、排阻以及親和五種類型.

利用組分在吸附劑（固定相）上的吸附能力強(qiáng)弱不同而得以分離的方法，稱為吸附色譜法.固定相是固體，目前這種分離模式在液相色譜中用途很小.

利用組分在固定液或者鍵合固定相（固定相）中溶解度不同而達(dá)到分離的方法稱為分配色譜法.固定相是涂覆的固定液或者鍵合的固定相，是目前主流的分離模式，涵蓋了目前液相色譜應(yīng)用范圍的大部.

利用組分在離子交換劑（固定相）上的親和力大小不同而達(dá)到分離的方法，稱為離子交換色譜法.該分離模式主要用來分離離子型化合物，正是由于如此，現(xiàn)在離子色譜已經(jīng)從液相色譜中分離出來，稱為離子色譜.

利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇滲透而達(dá)到分離的方法，稱為凝膠色譜法或尺寸排阻色譜法.這個主要用來分離高分子子化合物，比如蛋白、比如聚合物.

利用不同組分與固定相（固定化分子）的高專屬性親和力進(jìn)行分離的稱為親和色譜法，常用于蛋白質(zhì)分離.

4.色譜法有哪四種常見的方法

高效液相色譜法處理，以指示的 ①的高壓力：更大的阻力，流動的液體通過高壓迅速通過該柱通過柱的流動相，液體載體。

②高效：分離效率高。選擇一個固定相和流動相，以便達(dá)到最佳的分離效果，并且是工業(yè)精餾塔和氣相色譜分離性能高出許多倍。

③高靈敏度：紫外檢測器可達(dá)0.01ng，μL級的注射量。的 ④由高性能液相色譜法分析，特別是高沸點(diǎn)的分離和分析，大分子，強(qiáng)極性，熱穩(wěn)定性差的化合物，可用于廣泛的應(yīng)用范圍：70%以上的有機(jī)化合物的，示出的優(yōu)點(diǎn)。

⑤分析速度快，載液的流速快：速度更快，更經(jīng)典的液相色譜通常在15至30分鐘的樣品分析，部分樣品甚至在五分鐘內(nèi)完成，一般不超過1小時。 此外，高效液相層析柱可？？反復(fù)使用，和樣品不被破壞，易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜法相比，有自己的長處和優(yōu)勢互補(bǔ)。

的缺點(diǎn)的高性能液相色譜法“列效果。從噴射器到檢測器上，在除了比支柱死空間（噴射器，柱接頭，連接管和檢測器單元等）的任何其他的類型，如果流動相流量的變化在任何要被分離和滯留的物質(zhì)的擴(kuò)散會導(dǎo)致擴(kuò)大的峰，柱效降低顯著高性能液相色譜檢測器的靈敏度是小于在氣相色譜儀中。

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5.分離純化常用的色譜分離方法有哪些

1、色譜方法根據(jù)分離機(jī)制的不同可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠過濾（分子篩）色譜和親和色譜等.2、（1）吸附色譜法是指混合物隨流動相通過吸附劑時，由于該吸附劑對不同物質(zhì)有不同的吸附力而使混合物分離的方法.（2）分配色譜系法是利用固定相與流動相之間對待分離組分溶解度的差異來實(shí)現(xiàn)分離.（3）離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術(shù)的結(jié)合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法.凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法進(jìn)行分離.（4）凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術(shù)，是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術(shù)，由于設(shè)備簡單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對高分子物質(zhì)有很高的分離效果.（5）親和色譜法是將相互間具有高度特異親和性的二種物質(zhì)之一作為固定相，利用與固定相不同程度的親和性，使成分與雜質(zhì)分離的色譜法.。

6.色譜分析中常用的分析方法有哪些

環(huán)境監(jiān)測中常用到的色譜分析方法有： 氣相色 譜法、高效液相色譜法、離子色譜法。

環(huán)境監(jiān)測是通過對人類和環(huán)境有影響的各種物質(zhì)的含量、排放量的檢測，跟蹤環(huán)境質(zhì)量的變化，確定環(huán)境質(zhì)量水平，為環(huán)境管理、污染治理等工作提供基礎(chǔ)和保證。簡單地說，了解環(huán)境水平，進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測，是開展一切環(huán)境工作的前提。

環(huán)境監(jiān)測通常包括背景調(diào)查、確定方案、優(yōu)化布點(diǎn)、現(xiàn)場采樣、樣品運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)分析、數(shù)據(jù)收集、分析綜合等過程?？偟膩碚f，就是計(jì)劃-采樣-分析-綜合的獲得信息的過程。

7.常用的層析分析方法有哪些

在分離分析特別是蛋白質(zhì)分離分析中，層析是相當(dāng)重要、且相當(dāng)常見的一種技術(shù)，其原理較為復(fù)雜，對人員的要求相對較高，這里只能做一個相對簡單的介紹。

一、吸附層析 1、吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機(jī)溶劑或緩沖液為流動相構(gòu)成柱的一種層析方法。 2、薄層層析 薄層層析是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質(zhì)為固定相，以液體為流動相的一種層析方法。

這種層析方法是把吸附劑等物質(zhì)涂布于載體上形成薄層，然后按紙層析操作進(jìn)行展層。 3、聚酰胺薄膜層析 聚酰胺對極性物質(zhì)的吸附作用是由于它能和被分離物之間形成氫鍵。

這種氫鍵的強(qiáng)弱就決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時，展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競爭形成氫鍵。

因此選擇適當(dāng)?shù)恼箤觿┦狗蛛x在聚酰胺膜表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續(xù)過程，就能導(dǎo)致分離物質(zhì)達(dá)到分離目的。 常用的層析分析方法，登錄生物幫看看。

/zt/focus/ 生物熱點(diǎn)研究，生物學(xué)熱點(diǎn)問題。