folin測定可溶性蛋白質(zhì)(Folin酚法（Lowry）測定蛋白質(zhì)的分子量應(yīng)的注意事項)

1.Folin酚法（Lowry）測定蛋白質(zhì)的分子量應(yīng)的注意事項

儀器有分光光度計 臺式離心機 精密天平 三角瓶 燒杯 量筒 移液器 Folin—酚試劑法最早由Lowry確定了蛋白質(zhì)濃度測定的基本步驟。

以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。這種蛋白質(zhì)測定法是最靈敏的方法之一。

過去此法是應(yīng)用最廣泛的一種方法，由于其試劑乙的配制較為困難（現(xiàn)在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。

這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深藍色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。 Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深藍色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。

在一定的條件下，藍色深度與蛋白的量成正比。

2.Folin

Folin-酚法蛋白定量包括兩步反應(yīng)：第一步生成蛋白質(zhì)一銅絡(luò)合物； 第二步是酚基將磷鑰酸、磷鎢酸試劑還原. 試劑甲由A(4%碳酸鈉溶液與0.2mol/L氫氧化鈉溶液等體積混合)和B(1%硫酸銅溶液與2%的酒石酸鉀鈉溶液等體積混合)

兩種溶液組成.你說的加了甲后10min再加乙，因為第一步反應(yīng)肯定要時間的，

試劑甲當(dāng)然不能省了，其他的不說，它最起碼提供了堿性的反應(yīng)條件，

Folin-酚法測定蛋白酶活力的原理是蛋白酶水解酪蛋白產(chǎn)生Tyr， 在堿性條件下，Tyr與Folin試劑反應(yīng)生產(chǎn)藍色物質(zhì)，于680nm比色測定光吸收值，計算酶活力。要繪制 Tyr標(biāo)準(zhǔn)曲線，

這兩個共同的步驟是第二步顯色反應(yīng).