目視比色法(比色法操作的注意事項(xiàng)是什么?)
1.比色法操作的注意事項(xiàng)是什么?
噻唑藍(lán)（MTT）比色法操作注意事項(xiàng)
噻唑藍(lán)（MTT）：四唑鹽
1. 原理：
MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法.活細(xì)胞中脫氫酶能將四唑鹽還原成不溶干水的藍(lán)紫色產(chǎn)物，并沉淀在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒有這種功能。二甲亞砜（DMSO）能溶解沉積在細(xì)胞中藍(lán)紫色結(jié)晶物，溶液顏色深淺與活細(xì)胞數(shù)成正比。
2. 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)
3. 缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測(cè)。這不僅使工作量增加，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害。
4. 應(yīng)用：新藥篩選、細(xì)胞毒牲試驗(yàn)、腫瘤放射敏感性實(shí)驗(yàn)等
5. MTT主要有兩個(gè)用途
1）藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測(cè)定；
2） 細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測(cè)定。
6. 比色法操作注意事項(xiàng)
1） 選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度，保證細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時(shí)濃度不至于過滿。
2） 種板技術(shù)：均勻。
3） 實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置調(diào)零孔，溶媒孔，加藥孔。
調(diào)零孔：培養(yǎng)基、MTT、DMSO。（無細(xì)胞）
溶媒孔：培養(yǎng)液、MTT、DMSO、細(xì)胞、溶酶。
加藥孔：培養(yǎng)液、MTT、DMSO、細(xì)胞、不同濃度的藥物。
（一般5-7個(gè)梯度，設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔）
4）避免血清干擾：一般選小于10%胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行。
5）邊緣效應(yīng)：周邊孔加入PBS。
6)MTT的配置： MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸緩沖液。4℃下避光保存2周。
7）孔板的重復(fù)利用（1.做完MTT后用大水流盡量將板沖凈，然后用洗衣粉水泡幾個(gè)小時(shí)（小心最好讓洗衣粉先化開）。2.用自來水沖凈洗衣粉水，倒扣晾
干.3.重鉻酸鉀加濃硫酸配成的酸液中浸泡過夜泡洗液（六小時(shí)以上即可）后自來水洗凈（20次左右）每個(gè)孔都要處理4.用去離子水沖洗3遍，雙蒸水沖洗3
遍，烤干5.超凈臺(tái)中紫外線照射2個(gè)小時(shí)左右，就可以用了，不可以高壓?；蚺菟徇^夜，dd水沖洗干凈，烘干或者晾干后紫外照射30min以上即可使用。
8)MTT法只能用來檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力，但不能測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。
9）在用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范圍內(nèi)。
10)MTT有致癌性，用的時(shí)候小心，有條件最好帶那種透明的簿膜手套。
11）配成的MTT需要無菌，MTT對(duì)菌很敏感；往96孔板加時(shí)不避光也沒有關(guān)系，畢竟時(shí)間較短，或者你不放心的時(shí)候可以操作臺(tái)上的照明燈關(guān)掉。
2.目視比濁法
方法提要
濁度與透視度呈反比關(guān)系，水樣與標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行透視度比測(cè)，定值。本方法規(guī)定1000mL純水中含高嶺土1mg的濁度為1°。
本法適用于近海海域和大洋水濁度的測(cè)定。3個(gè)實(shí)驗(yàn)室分析了用無濁純水配制水樣，濃度分別為7.0mg/L和50.0mg/L，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.78%，相對(duì)誤差為4.10%。
試劑
無濁純水取蒸餾水或去離子水，通過0.2μm濾膜抽濾，貯存于聚乙烯桶中，用過濾水淋洗聚乙烯桶2次，棄去初濾水200mL，最好當(dāng)天制備。
濾膜（0.2μm）。
二氯化汞溶液（50g/L）（注意：二氯化汞劇毒，小心操作！）。
焦磷酸鈉溶液（50g/L）。
高嶺土（機(jī)選特號(hào)）。
濁度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液將高嶺土置于（105±1）℃烘箱中烘干2h，移入盛有硅膠的干燥器中，冷卻30min。稱取3~5g高嶺土，置于瑪瑙研缽中加少量水調(diào)成稀糊狀，研磨約50min，全部轉(zhuǎn)移入1000mL量筒中，補(bǔ)加純水到1000mL標(biāo)線處，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅冢?0±0.5）℃下靜置24h。用虹吸法吸取上層800mL懸濁液移入第2個(gè)1000mL量筒中，補(bǔ)加無濁純水到1000mL標(biāo)線處，充分?jǐn)噭蚝螅俅沃糜冢?0±0.5）℃下靜放24h。用虹吸法吸除上層液800mL，留取底層200mL懸濁液并加純水到1000mL標(biāo)線，然后盛于1000mL棕色試劑瓶中，塞嚴(yán)保存。
濁度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濁度的標(biāo)定量取50.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于恒量（m1）的蒸發(fā)皿中，置于水浴鍋上蒸干，移于105℃干燥箱中烘2h。置于硅膠干燥器中冷卻30min，稱量（m2）。重復(fù)烘干、冷卻、稱量步驟，直到兩次質(zhì)量差小于0.2mg。按下式計(jì)算濁度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液中高嶺土的質(zhì)量濃度：
巖石礦物分析第四分冊(cè)資源與環(huán)境調(diào)查分析技術(shù)
式中：ρ高嶺土為濁度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液中高嶺土的質(zhì)量濃度，mg/mL;V為量取濁度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的體積，50.0mL;m1為蒸發(fā)皿的質(zhì)量，g;m2為蒸發(fā)皿加烘干后高嶺土的質(zhì)量，g。
此濁度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濁度=ρ高嶺土*1000。
濁度標(biāo)準(zhǔn)中間溶液準(zhǔn)確量取一定體積含有250mg高嶺土的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液置于1000mL容量瓶中，加入1.0g二氯化汞（HgCl2）；溶解后，補(bǔ)加無濁純水至標(biāo)線，充分混勻，轉(zhuǎn)入具橡皮塞的棕色試劑瓶中。此標(biāo)準(zhǔn)中間溶液濃度為0.25mg/mL。濁度為250°。
濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液移取40.0mL濁度標(biāo)準(zhǔn)中間溶液置于100mL容量瓶中，加入0.50mL焦磷酸鈉溶液，加無濁純水至標(biāo)線，混勻。此液濁度為100°。
校準(zhǔn)曲線取12支100mL具塞比色管，分別加入0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL、7.00mL、8.00mL、9.00mL、10.0mL濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入50.0mL二氯化汞溶液，然后再加無濁純水至標(biāo)線，混勻。此系列濁度分別為0°、0.50°、1.00°、2.00°、3.00°、4.00°、5.00°、6.00°、7.00°、8.00°、9.00°、10.0°。
分析步驟
將混勻的水樣，傾入具塞比色管中至標(biāo)線，立即同標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。水樣濁度為0°~10°范圍的測(cè)定，用黑色背景，垂直目視比較而定；10°以上的測(cè)定用黃色方格坐標(biāo)紙為背景，水平透視方格線條的清晰程度而定量。然后將測(cè)定值記入渾濁度記錄表，取兩位有效讀數(shù)；若水樣濁度超過100°，則需用無濁純水稀釋水樣至可測(cè)范圍，將測(cè)定值乘以稀釋倍數(shù)，即為原水樣濁度。
注意事項(xiàng)
1）每次量取水樣或標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)，必須將水樣瓶橫放，上下強(qiáng)烈振蕩30次后，立即取出水樣。
2）玻璃試劑瓶磨口與磨口塞之間，在啟瓶對(duì)磨中，可增大所盛液體的濁度。因此所用水樣瓶及試劑瓶，均應(yīng)配換橡膠塞，并將膠塞置于盛純水的燒杯中煮沸2h。
3）水樣中具有迅速下沉的碎屑及粗大沉淀物都可被測(cè)定為濁度。不潔凈的玻璃器皿和空氣泡，以及擾亂水樣表面能見度的振動(dòng)都能造成虛假結(jié)果。
4）水樣保存，在取樣當(dāng)天測(cè)定濁度。如果不可避免要保持更長(zhǎng)時(shí)間，將水樣保存暗處可達(dá)24h。如若在樣品中加HgCl2固定劑，可保存22d。
5）除非另作說明，本法中所用試劑均為分析純，水為無濁水或等效純水。
3.比色法操作的注意事項(xiàng)是什么?
1選擇合適的熔樣方法，制備合適的試樣溶液（1）氫氧化鈉為熔劑，鹽酸分解；（2）碳酸鈉燒結(jié)，鹽酸分解或碳酸鈉燒結(jié)，氯化銨重量法測(cè)定純SiO。
時(shí)的濾液，以及純SiO。殘?jiān)?jīng)焦硫酸鉀熔融后分解溶液，二者合并；（3）碳酸鈉一硼砂為混合熔劑，稀硝酸和稀硫酸溶解后之濾液，或者稀硝酸溶解液，或濃鹽酸分解。
2顯色反應(yīng)（1）掩蔽劑與顯色劑應(yīng)有正確的配制和保存方法，否則影響吸光度。（2）顯色溫度與時(shí)間。
顯色反應(yīng)有一定的溫度和時(shí)間要求，如高碘酸鉀氧化比色法分析MnO，應(yīng)微沸10~15min使顯色完全，并冷卻至室溫下比色。二安替比林甲烷比色法分析TiO。
由于顯色反應(yīng)較慢，顯色時(shí)間則需較長(zhǎng)時(shí)間（40min以上）。（3）比色。
比色儀器分光光度計(jì)應(yīng)定期檢定，應(yīng)選擇正確的波長(zhǎng)，合適光程的比色皿。色皿應(yīng)保持干凈，受污染的比色皿可用稀硝酸浸洗，用鏡頭紙擦拭表面，比色皿內(nèi)液體不能有氣泡或懸浮物。
通常情況下，比色測(cè)定在室溫進(jìn)行。
4.什么叫比色法?操作上應(yīng)該注意什么問題?
定義 以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)，通過比較或測(cè)量有色物質(zhì)溶液顏色深度來確定待測(cè)組分含量的方法。
比色法作為一種定量分析的方法，開始于19世紀(jì)30~40年代。比色分析對(duì)顯色反應(yīng)的基本要求是：反應(yīng)應(yīng)具有較高的靈敏度和選擇性，反應(yīng)生成的有色化合物的組成恒定且較穩(wěn)定，它和顯色劑的顏色差別較大。
選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)和控制好適宜的反應(yīng)條件，是比色分析的關(guān)鍵。 常用方法 常用的比色法有兩種：目視比色法和光電比色法，兩種方法都是以朗伯-比爾定律[1](A=εbc)為基礎(chǔ)。
常用的目視比色法是標(biāo)準(zhǔn)系列法，即用不同量的待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)溶液在完全相同的一組比色管中，先按分析步驟顯色，配成顏色逐漸遞變的標(biāo)準(zhǔn)色階。試樣溶液也在完全相同條件下顯色，和標(biāo)準(zhǔn)色階作比較，目視找出色澤最相近的那一份標(biāo)準(zhǔn)，由其中所含標(biāo)準(zhǔn)溶液的量，計(jì)算確定試樣中待測(cè)組分的含量。
光電比色法是在光電比色計(jì)上測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，將吸光度對(duì)濃度作圖，繪制工作曲線，然后根據(jù)待測(cè)組分溶液的吸光度在工作曲線上查得其濃度或含量。與目視比色法相比，光電比色法消除了主觀誤差，提高了測(cè)量準(zhǔn)確度，而且可以通過選擇濾光片來消除干擾，從而提高了選擇性。
但光電比色計(jì)采用鎢燈光源和濾光片，只適用于可見光譜區(qū)和只能 得到一定波長(zhǎng)范圍的復(fù)合光 ， 而不是單色光束，還有其他一些局限，使它無論在測(cè)量的準(zhǔn)確度、靈敏度和應(yīng)用范圍上都不如紫外-可見分光光度計(jì)。20 世紀(jì)30~60年代，是比色法發(fā)展的旺盛時(shí)期，此后就逐漸為分光光度法所代替。
比色法在無機(jī)材料分析中的應(yīng)用及注意事項(xiàng)： 1比色法的應(yīng)用比色法是利用溶液顏色的深淺來確定待測(cè)物質(zhì)含量的一種方法.在無機(jī)材料低含量成分分析中，與常用的滴定法、重量法比較，比色法具有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度.例如，TiO2滴定法，存在操作麻煩、終點(diǎn)顏色難以辨認(rèn)的缺點(diǎn).礬土、普通礦渣、鐵礦石中的TiO2、MnO，粘土、水泥中的TiO2，石灰石中的SiO2、Al2O3、Fe2O3，硅砂中的Fe2O3等等，這些成份含量低，一般在5%以下，若采用滴定法分析，0.05ml的滴定量就造成較大的誤差，甚至未能檢測(cè)出結(jié)果.特別是硅質(zhì)玻璃原料硅砂中的Fe2O3，微量Fe2O3直接影響其產(chǎn)品質(zhì)量的評(píng)級(jí)，因此不能采用滴定法，而應(yīng)采用比色法進(jìn)行分析（見JC/T753-2001硅質(zhì)玻璃原料化學(xué)分析方法）.比色法是無機(jī)材料化學(xué)成分分析的常用方法之一，TiO2、MnO、Al2O3、Fe2O3、SiO2等低含量成份，采用比色法可獲得較高的準(zhǔn)確度，從而能更好地指導(dǎo)生產(chǎn).。
5.目視觀察法注意的事項(xiàng)有哪些
(1)試樣的控制，試樣受檢面必須保持完整，不允許有擦花或劃傷等破壞，而且受檢面必須清潔，不允許有污漬、油污等臟物覆蓋在受檢面上，因此測(cè)試前一般要用不破壞氧化膜的有機(jī)溶劑輕輕擦拭試樣表面； （2）試驗(yàn)溶液濃度的控制，氫氧化鈉溶液的濃度必須嚴(yán)格控制到100g/L，濃度偏低或偏高將直接導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果偏大或偏??； （3）試驗(yàn)溫度的控制，試驗(yàn)時(shí)不僅要保證試驗(yàn)環(huán)境溫度控制在35℃±1℃，而且試驗(yàn)溶液和試樣也必須控制在35℃±1℃，為此在測(cè)試前應(yīng)先將試液和試樣放置于恒溫儀器中保持一段時(shí)間，只有當(dāng)試液和試樣恒定在35℃±1℃之后才可以進(jìn)行測(cè)試。
6.目視觀察法的注意事項(xiàng)有哪些
對(duì)于滴堿試驗(yàn)考慮的關(guān)鍵是，試驗(yàn)溫度的控制以及如何準(zhǔn)確地判斷氧化膜剛好被穿透的時(shí)間。
我國(guó)GB/T5237。2-2000中對(duì)滴堿試驗(yàn)方法規(guī)定為：“在35℃±1℃下，將大約10mg、100g/LNaOH溶液滴至型材試樣的表面，目視觀察液滴處直至產(chǎn)生腐蝕冒泡，計(jì)算其氧化膜被穿透的時(shí)間。
也可用儀器測(cè)量氧化膜穿透的時(shí)間?！币簿褪钦f，國(guó)標(biāo)認(rèn)可了兩種滴堿試驗(yàn)方法，即目視觀察法和儀器測(cè)量法。
對(duì)于目試驗(yàn)觀察法，國(guó)標(biāo)描述的比較簡(jiǎn)單，試驗(yàn)操作中的一些注意事項(xiàng)及其影響因素未作描述。而為了保證測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，在操作過程中對(duì)于影響因素應(yīng)加以注意，以便盡可能減少或避免這些因素的影響，本方法應(yīng)注意的事項(xiàng)主要有以下幾點(diǎn)： （1）試樣的控制，試樣受檢面必須保持完整，不允許有擦花或劃傷等破壞，而且受檢面必須清潔，不允許有污漬、油污等臟物覆蓋在受檢面上，因此測(cè)試前一般要用不破壞氧化膜的有機(jī)溶劑輕輕擦拭試樣表面； （2）試驗(yàn)溶液濃度的控制，氫氧化鈉溶液的濃度必須嚴(yán)格控制到100g/L，濃度偏低或偏高將直接導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果偏大或偏?。?（3）試驗(yàn)溫度的控制，試驗(yàn)時(shí)不僅要保證試驗(yàn)環(huán)境溫度控制在35℃±1℃，而且試驗(yàn)溶液和試樣也必須控制在35℃±1℃，為此在測(cè)試前應(yīng)先將試液和試樣放置于恒溫儀器中保持一段時(shí)間，只有當(dāng)試液和試樣恒定在35℃±1℃之后才可以進(jìn)行測(cè)試；其四是恒溫儀器的選用，恒溫儀器的選用在本方法中是一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)，因?yàn)樗x用的恒溫儀器不僅應(yīng)起到恒溫的作用，還必須考慮要便于觀察儀器內(nèi)試樣的變化情況，如果所選用的恒溫儀器沒有一個(gè)能夠清晰地觀察儀器內(nèi)試樣變化情況的觀察口，那么要想準(zhǔn)確地判斷出試樣何時(shí)開始腐蝕冒泡是不大可能的。
另外，目視觀察法還受試驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)的影響，在實(shí)際檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，從陽極氧化膜開始溶解到氧化膜被穿透（試樣開始腐蝕冒泡）這一過程中并沒有一個(gè)很明顯的變化，給氧化膜穿透時(shí)間的判斷帶來很大難度，這就對(duì)試驗(yàn)人員提出了很高的要求，試驗(yàn)人員必須要有非常豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，能夠準(zhǔn)確地判斷出氧化膜何時(shí)被穿透而開始腐蝕冒泡。
7.如何用目視比色法快速測(cè)試果園土壤和果樹植株氮磷鉀速效養(yǎng)分
第一步：果園土壤和果樹植物供試液的制備。
土壤中易被作物吸收利用的養(yǎng)分稱為土壤速效養(yǎng)分，這些養(yǎng) 分主要存在于土壤溶液和土壤膠體上，用適當(dāng)?shù)乃帷A或鹽類的 溶液處理土壤，可將它們?nèi)芙夂痛鷵Q出來i①測(cè)定土壤硝態(tài)氮、銨態(tài)氮和速效鉀供試液的制備（此為供 試液I）。 稱取相當(dāng)于2克干土的濕土，放入干凈的小浸提杯中，用量筒加入0。
5摩爾/升硫酸鈉（Na2S04? 10H2O）溶液10毫 升，蓋好杯子，用力上下?lián)u動(dòng)300次后，打開杯蓋，將折疊好的7厘米中速濾紙，使尖端向下放入小杯子中，以滲透于濾紙錐形 - 體內(nèi)的清液供測(cè)試硝態(tài)氮、銨態(tài)氮和速效鉀備用。 ②測(cè)定土壤速效憐供試液的制備（此為供試液II）。
稱取相 當(dāng)于2克干土的濕土，放入干凈的小浸提杯中，用量筒加人0。5 摩爾/升碳酸氫鈉（NaHC03）浸提劑10毫升，蓋好杯子，振蕩 和滲濾方法同供試液工。
③植物供試液的制備（此為供試液IE）。果樹根系自土壤中 吸收的無機(jī)養(yǎng)分，在果樹根系、枝、葉等組織液中有所積累，用 組織汁液測(cè)定它們的含量，可以反應(yīng)土壤養(yǎng)分的供應(yīng)狀況，作為 營(yíng)養(yǎng)水平的指標(biāo)。
制備植物供試液的方法很多，現(xiàn)介紹用冷水浸 提制備供試液：把處理好的果樹待測(cè)部位（一般是葉片或葉柄）取下，用剪 刀剪碎，在1/100托盤天平上稱樣0。5克，放入小浸提杯中，并 用玻璃棒搗碎，然后加蒸餾水10毫升，蓋好杯子紀(jì)振蕩和滲濾 步驟同土壤供試液的制備。
第二步：果園土壤和果樹植株速效氮磷鉀養(yǎng)分的測(cè)定。①土壤和植株中硝態(tài)氮（N03— N）的測(cè)定3制備標(biāo)準(zhǔn)色階 和供試液中硝態(tài)氮的測(cè)定，可同時(shí)在比色盤中，按硝態(tài)氮測(cè)定表 5 - 5進(jìn)行。
表格里的雙線左上方，為制備比色標(biāo)準(zhǔn)溶液，。
雙線的右上方 為待測(cè)試液，只有在標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液都按要求依次制備好 后，才能同時(shí)按雙線以下各操作步驟進(jìn)行。
8.目視比色法的缺點(diǎn)
目視比色法的主要缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度不高，如果待測(cè)液中存在第二種有色物質(zhì)，甚至?xí)o法進(jìn)行測(cè)定。另外，由于許多有色溶液顏色不穩(wěn)定，標(biāo)準(zhǔn)系列不能久存，經(jīng)常需在測(cè)定時(shí)配制，比較麻煩。雖然可采用其某些穩(wěn)定的有色物質(zhì) （ 如重鉻酸鉀、硫酸銅和硫酸鈷等 ） 配制永久性標(biāo)準(zhǔn)系列，或利用有色塑料、有色玻璃制成永久色階，但由于它們的顏色與試液的顏色往往有差異，也需要進(jìn)行校正。
9.大家能不能介紹一下比色法
通過比較或測(cè)量有色物質(zhì)溶液顏色深度來確定待測(cè)組分含量的方法以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)，通過比較或測(cè)量有色物質(zhì)溶液顏色深度來確定待測(cè)組分含量的方法。
比色法作為一種定量分析的方法，開始于19世紀(jì)30~40年代。比色分析對(duì)顯色反應(yīng)的基本要求是：反應(yīng)應(yīng)具有較高的靈敏度和選擇性，反應(yīng)生成的有色化合物的組成恒定且較穩(wěn)定，它和顯色劑的顏色差別較大。
選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)和控制好適宜的反應(yīng)條件，是比色分析的關(guān)鍵。 常用的比色法有兩種：目視比色法和光電比色法，兩種方法都是以朗伯-比爾定律[1](A=εbc)為基礎(chǔ)。
常用的目視比色法是標(biāo)準(zhǔn)系列法，即用不同量的待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)溶液在完全相同的一組比色管中，先按分析步驟顯色，配成顏色逐漸遞變的標(biāo)準(zhǔn)色階。試樣溶液也在完全相同條件下顯色，和標(biāo)準(zhǔn)色階作比較，目視找出色澤最相近的那一份標(biāo)準(zhǔn)，由其中所含標(biāo)準(zhǔn)溶液的量，計(jì)算確定試樣中待測(cè)組分的含量。
光電比色法是在光電比色計(jì)上測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，將吸光度對(duì)濃度作圖，繪制工作曲線，然后根據(jù)待測(cè)組分溶液的吸光度在工作曲線上查得其濃度或含量。與目視比色法相比，光電比色法消除了主觀誤差，提高了測(cè)量準(zhǔn)確度，而且可以通過選擇濾光片來消除干擾，從而提高了選擇性。
但光電比色計(jì)采用鎢燈光源和濾光片，只適用于可見光譜區(qū)和只能 得到一定波長(zhǎng)范圍的復(fù)合光 ， 而不是單色光束，還有其他一些局限，使它無論在測(cè)量的準(zhǔn)確度、靈敏度和應(yīng)用范圍上都不如紫外-可見分光光度計(jì)。20 世紀(jì)30~60年代，是比色法發(fā)展的旺盛時(shí)期，此后就逐漸為分光光度法所代替。
