酶一般性質(zhì)的測定(酶活力測定的注意事項有哪些)
1.酶活力測定的注意事項有哪些
測定酶活力時，必須注意以下幾點：
1、酶促反應(yīng)過程中，只有最初一段時間內(nèi)反應(yīng)速度與酶濃度成正比，隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)速度即逐漸降低。
2、要規(guī)定一定的反應(yīng)條件，如時間、溫度、pH等，并在酶測定過程中保持這些反應(yīng)條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的士1℃，pH應(yīng)恒定。
3、配制的底物濃度應(yīng)準(zhǔn)確且足夠大，底物液中應(yīng)加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。
4、標(biāo)本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低，標(biāo)本如無法及時測定，應(yīng)保存于冰箱中。用血漿時，應(yīng)考慮到抗凝劑對酶反應(yīng)的影響。有些酶在血細(xì)胞、血小板中的濃度比血清高，為此在采血、分離血清時，應(yīng)注意防止溶血和白細(xì)胞的破裂。
5、在測定過程中，所用儀器應(yīng)絕對清潔，不應(yīng)含有酶的抑制物，如酸、堿、蛋白沉淀劑等。
擴(kuò)展資料：
酶活力
1、單位：在特定條件下，1分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化1微摩爾底物所需的酶量為一個活力單位（U）。溫度規(guī)定為25度，其他條件取反應(yīng)的最適條件。
2、比活力：每毫克酶蛋白所具有的酶活力。單位是u/mg。比活力越高則酶越純。
3、轉(zhuǎn)化數(shù)：每分子酶或每個酶活性中心在單位時間內(nèi)能催化的底物分子數(shù)（TN）。相當(dāng)于酶反應(yīng)的速度常數(shù)kp。也稱為催化常數(shù)（Kcat）。1/kp稱為催化周期。碳酸酐酶是已知轉(zhuǎn)換數(shù)最高的酶之一，高達(dá)36*106每分，催化周期為1.7微秒。
參考資料來源：百度百科——酶活力
參考資料來源：百度百科——酶活性測定
2.酶活力測定的注意事項有哪些
1.底物濃度 除選擇適合的底物外，在實際應(yīng)用中更多考慮的是底物濃度。由于[S]與反應(yīng)速度V成雙曲線關(guān)系，在酶活性測定時，要求[S]達(dá)到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[S]范圍一般選擇在10~20Km為宜，此時反應(yīng)速度基本達(dá)到最大反應(yīng)速度，測定的誤差在可接受范圍。
2.酶濃度 在反應(yīng)條件一定時，酶濃度與反應(yīng)速度成正比。按照中間產(chǎn)物學(xué)說，只有[S]>>[E]時，酶才能被底物分子飽和，反應(yīng)速度才能達(dá)到最大值。因此當(dāng)標(biāo)本酶活力過高時，應(yīng)將標(biāo)本適當(dāng)稀釋后再加以測定。
3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同，多數(shù)酶的最適溫度在37~40℃，高于或低于最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測定溫度尚未統(tǒng)一，但常規(guī)實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應(yīng)的影響程度通常用溫度系數(shù)（Q10）表示。溫度系數(shù)指溫度每升高10℃，化學(xué)反應(yīng)速度增加的倍數(shù)。Q10通常為l~2。由溫度系數(shù)得知，溫度的變化對酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測定要在恒溫條件下進(jìn)行，溫度波動要控制在±1℃。
4.離子強度和pH值 在最適pH時，酶的活性最強，高于或低于最適pH，酶的活性都降低，多數(shù)酶的最適pH在5~8之間。在測定酶活性時，要求緩沖液具有足夠的緩沖容量，以便使pH值保持穩(wěn)定。血漿或血清標(biāo)本含有多種緩沖溶質(zhì)，具有較強的緩沖能力。為了防止血漿或血清標(biāo)本緩沖溶質(zhì)對反應(yīng)液酸堿度的影響，使pH不致偏離設(shè)定值，標(biāo)本用量不宜過大，血漿或血清標(biāo)本體積/反應(yīng)液體積≤1/10為宜。
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結(jié)合酶的輔助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的輔基，Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，NADH是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現(xiàn)活性，因此在酶活性測定時，就要保證輔基或輔酶的供給。
6.激活劑 有些酶在有激活劑存在時才有活性或活性較高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑，Cl-是淀粉酶的激活劑。因此在酶活性測定時，也要滿足酶對激活劑的需要。
7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機(jī)磷對羥基酶的抑制屬于不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬于競爭性抑制；哇巴因?qū)a+,K+-ATP酶的抑制屬于非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測定酶活性時，應(yīng)避免抑制劑的影響。
綜上所述，測定酶活性時，最適條件的選擇應(yīng)該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適pH值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則。
3.測定酶活性時應(yīng)注意些什么?
酶的活性測定要求有適宜的特定反應(yīng)條件，應(yīng)注意影響酶促反應(yīng)速度的各種因素應(yīng)該相對恒定。
1.酶的樣品應(yīng)做適當(dāng)?shù)奶幚怼?.反應(yīng)體系中，底物的量足夠使酶被底物飽和，以充分反映待測酶的活力。
但過高的底物濃度可能抑制酶的活性，一般底物濃度在10km以上。3.測定代謝物時應(yīng)保持酶的足夠濃度。
4.應(yīng)根據(jù)反應(yīng)時間選擇反應(yīng)的最適溫度。5.根據(jù)不同的底物和緩沖液選擇反應(yīng)的最適pH。
6.為獲取最高反應(yīng)速度，在反應(yīng)體系中應(yīng)含有適宜的輔助因子，激活劑等。7.測定酶活性時應(yīng)測定酶促反應(yīng)的初速度。
4.進(jìn)行酶活力測定時應(yīng)注意什么
測定酶活力時，必須注意以下幾點： （1）酶促反應(yīng)過程中，只有最初一段時間內(nèi)反應(yīng)速度與酶濃度成正比，隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)速度即逐漸降低。
（2）要規(guī)定一定的反應(yīng)條件，如時間、溫度、pH等，并在酶測定過程中保持這些反應(yīng)條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的士1℃，pH應(yīng)恒定。 （3）配制的底物濃度應(yīng)準(zhǔn)確且足夠大，底物液中應(yīng)加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。
（4）標(biāo)本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低，標(biāo)本如無法及時測定，應(yīng)保存于冰箱中。用血漿時，應(yīng)考慮到抗凝劑對酶反應(yīng)的影響。
有些酶在血細(xì)胞、血小板中的濃度比血清高，為此在采血、分離血清時，應(yīng)注意防止溶血和白細(xì)胞的破裂。 （5）在測定過程中，所用儀器應(yīng)絕對清潔，不應(yīng)含有酶的抑制物，如酸、堿、蛋白沉淀劑等。
5.測定酶活力需要控制哪些條件
最適測定條件與條件的優(yōu)化
國際臨床化學(xué)聯(lián)合會（IFCC）和中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會均推薦選擇在“最適條件”下測定酶活性濃度。所謂最適條件是指能滿足酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度所需的條件。包括：①合適的底物和最適底物濃度；②理想的緩沖液種類和最適離子強度；③反應(yīng)液的最適pH；④最適反應(yīng)溫度；⑤合適的輔因子、激活劑濃度；⑥若是酶偶聯(lián)反應(yīng)，還需要確定指示酶和輔助酶的用量；⑦合理的測定時間，包括延滯期盡量短暫，有足夠的線性期；⑧合適的樣品與反應(yīng)試劑的比例；⑨足夠的檢測范圍；⑩盡量去除各種抑制劑等。
1.底物濃度
除選擇適合的底物外，在實際應(yīng)用中更多考慮的是底物濃度。由于[S]與反應(yīng)速度V成雙曲線關(guān)系，在酶活性測定時，要求[S]達(dá)到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[S]范圍一般選擇在10~20Km為宜，此時反應(yīng)速度基本達(dá)到最大反應(yīng)速度，測定的誤差在可接受范圍。
2.酶濃度
在反應(yīng)條件一定時，酶濃度與反應(yīng)速度成正比。按照中間產(chǎn)物學(xué)說，只有[S]>>[E]時，酶才能被底物分子飽和，反應(yīng)速度才能達(dá)到最大值。因此當(dāng)標(biāo)本酶活力過高時，應(yīng)將標(biāo)本適當(dāng)稀釋后再加以測定。
3.溫度
不同的酶最適溫度可以不同，多數(shù)酶的最適溫度在37~40℃，高于或低于最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測定溫度尚未統(tǒng)一，但常規(guī)實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應(yīng)的影響程度通常用溫度系數(shù)（Q10）表示。溫度系數(shù)指溫度每升高10℃，化學(xué)反應(yīng)速度增加的倍數(shù)。Q10通常為l~2。由溫度系數(shù)得知，溫度的變化對酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測定要在恒溫條件下進(jìn)行，溫度波動要控制在±1℃。
4.離子強度和pH值
在最適pH時，酶的活性最強，高于或低于最適pH，酶的活性都降低，多數(shù)酶的最適pH在5~8之間。在測定酶活性時，要求緩沖液具有足夠的緩沖容量，以便使pH值保持穩(wěn)定。血漿或血清標(biāo)本含有多種緩沖溶質(zhì)，具有較強的緩沖能力。為了防止血漿或血清標(biāo)本緩沖溶質(zhì)對反應(yīng)液酸堿度的影響，使pH不致偏離設(shè)定值，標(biāo)本用量不宜過大，血漿或血清標(biāo)本體積/反應(yīng)液體積≤1/10為宜。
5
輔助因子
某些金屬離子和維生素類輔酶是結(jié)合酶的輔助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的輔基，Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，NADH是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現(xiàn)活性，因此在酶活性測定時，就要保證輔基或輔酶的供給。
6.激活劑
有些酶在有激活劑存在時才有活性或活性較高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑，Cl-是淀粉酶的激活劑。因此在酶活性測定時，也要滿足酶對激活劑的需要。
7.抑制劑
酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機(jī)磷對羥基酶的抑制屬于不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬于競爭性抑制；哇巴因?qū)a+,K+-ATP酶的抑制屬于非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測定酶活性時，應(yīng)避免抑制劑的影響。
綜上所述，測定酶活性時，最適條件的選擇應(yīng)該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適pH值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則。
6.酶有哪些性質(zhì),生物制備對酶特性的要求有哪些
酶的特性
提 問：在化學(xué)上同學(xué)們也學(xué)習(xí)過催化劑，那么一般的催化劑都有哪些性質(zhì)呢？
學(xué)生回答：用量少而催化效率高，反應(yīng)前后不發(fā)生變化，促進(jìn)化學(xué)反應(yīng)迅速進(jìn)行等。
講 述：酶作為生物催化劑，除了具有上述一般催化劑的性質(zhì)外，還具有以下重要特性：
a.具有高效性：催化反應(yīng)的速度比一般的無機(jī)催化劑高106-107倍，有的酶催化反應(yīng)速度極快，如碳酸酐酶催化二氧化碳與水合成碳酸的反應(yīng)是已知最快的酶催化反應(yīng)之一。每一個酶分子在1秒鐘內(nèi)可以使105個二氧化碳分子發(fā)生水合反應(yīng)。
b.具有專一性：一種酶只能作用于某一類或某一種特定的物質(zhì)使其發(fā)生反應(yīng)。如麥芽糖酶只能催化麥芽糖分解成葡萄糖，胃蛋白酶只能催化食物中蛋白質(zhì)的分解。
c.酶的種類具有多樣性：酶的種類繁多，目前已知的約有2千多種。正是由于酶對反應(yīng)的專一性，成千上萬的化學(xué)反應(yīng)就需要許多的酶分別在各自代謝途徑的特定位置上發(fā)揮作用，保證新陳代謝有條不紊地進(jìn)行。
歸納總結(jié)：每一種酶都具有高效性和專一性，從酶的家族整體上看呈現(xiàn)出多樣性。
