evg染色(血涂片的血涂片)

1.血涂片的血涂片

1） 玻片的清洗：新玻片常有游離堿質(zhì)，因此應(yīng)用清洗液或10%鹽酸浸泡24小時，然后再徹底清洗。用過的玻片可放入適量肥皂水或合成洗滌劑的清水中煮沸20分鐘，再用熱水將肥皂和血膜洗去，用自來水反復(fù)沖洗，必要時再置95%乙醇中浸泡1小時，然后擦干或烤干備用。使用玻片時只能手持玻片邊緣，切勿觸及玻片表面；，以保持玻片清潔，干燥，中性、無油膩。

2） 細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感，在染色過程中玻片必須化學(xué)清潔，配制瑞氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染液必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，致使細(xì)胞的識別困難，甚至造成錯誤。

3） 一張良好的血片，要求厚薄適宜，頭體尾分明，分布均勻，邊緣整齊，兩側(cè)留有空隙。血片制好后最好立即固定染色，以免細(xì)胞溶解和發(fā)生退行性變。

4） 血膜未干透，細(xì)胞尚未牢固附在玻片上，在染色過程中容易脫落，因此血膜必需充分干燥.

5） 染色時間與染液濃度，室溫高低，細(xì)胞多少有關(guān).染液越淡，室溫越低，細(xì)胞越多，所需染色時間越長或應(yīng)適當(dāng)增加染液量，因此染色時間應(yīng)視具體情況而定.特別是更換新染料時必須經(jīng)試染，摸索最佳染色條件.

6） 染液不可過少，以防蒸發(fā)干燥染料沉著于血片上難沖洗干凈.

7） 沖洗時應(yīng)用流水將染液沖去.不能先倒掉染液，以免染料沉著于血片上.

8） 染色過深可用甲醇或酒精適當(dāng)脫色，最好不復(fù)染，必須復(fù)染時，可將染液先稀釋好再復(fù)染.

9） 染色時應(yīng)注意保護(hù)血膜尾部細(xì)胞，不能劃掉.因?yàn)轶w積較大細(xì)胞常在此處出現(xiàn).

2.如何給鹿角染色

植鞣革染色的效果，因染料不同、手法不同、使用時間、保養(yǎng)方法不同而異。

【酒精染料】是最便宜易得的手工皮革染料。優(yōu)點(diǎn)是水溶性，可以隨意混合調(diào)色（盡量同品牌內(nèi)），可加水稀釋調(diào)節(jié)顏色深淺，顏色選擇比較多，使用方法比較隨意：擦染、浸染、噴染都可以。

缺點(diǎn)是染后會使皮革變得干硬，需要額外補(bǔ)充油脂。這里重點(diǎn)說液體油染。

雖然用液體油性染料手工染色的話很難染得非常均勻沒有色差，但那種有深有淺的斑駁感覺非常適合表現(xiàn)手工制品質(zhì)樸又富于變化的氣質(zhì)。有天然砂石磨碎的，有經(jīng)上色再燒結(jié)的，正規(guī)加工的染色劑是無毒害的。

一般，裝飾用彩砂經(jīng)過精選加工而成，不含任何染料，具有無毒、無味、無污染、抗腐蝕、耐酸堿、抗暴曬、不變色等特點(diǎn)。只要是購買正規(guī)廠家的合格產(chǎn)品都沒有毒害。

在被染色的區(qū)域擦上風(fēng)油精慢慢揉開就好了。注意這樣處理完之后，用洗潔精或者牙膏再洗一下，建議不要用刷子刷，稍微洗洗就好了。

處理后的包包用毛巾擦干表面上的水分，然后有條件最好是再擦點(diǎn)那種皮具專門用的保護(hù)液之類的，因?yàn)橛猛觑L(fēng)油精之后其實(shí)能夠明顯的感覺到那塊區(qū)域沒有以前那么亮了，可能是清潔過度。用漂洗液！超市里很多賣的，產(chǎn)品包裝上有使用說明！一般泡在混合漂洗液的水里面20分鐘在用普通洗衣粉洗洗就OK了！彩漂液貴不如白漂液效果好。

3.ATP酶染色的具體步驟與注意事項(xiàng)?我最近要做肌肉組織切片的ATP

你所描述的問題很可能是溶液的pH值的問題，染色的結(jié)果與pH密切相關(guān)，附區(qū)分骨骼肌纖維類型的ATP酶組織化學(xué)方法： 顯示肌球蛋白的ATP，肌纖維I、II型。

1。 組織固定于10%~15%中性福爾馬林。

2。 水洗后入0。

88庶糖水溶液，或1%阿拉伯膠（100ml加30g庶糖）浸2~3d。 3。

冰凍切片10um，分別放入三種不同PH值的預(yù)孵育液內(nèi)，室溫下10min。PH分別為10。

4、4。65和4。

3（準(zhǔn)確）。 4。

入巴比妥鈉液（PH9。4）1min。

5。 入孵育液30min,37℃。

6。 2%氯化鈷（用前配制）3min 7。

蒸餾水洗3次1min/次 8。 1%硫化胺（用時配制）10min 9。

流水沖洗不少于10min。 10。

各級酒精脫水、透明、封片。 預(yù)孵育液： 1。

巴比妥鈉PH10。4，取巴比妥鈉4。

12g，氯化鈉1。998g，加蒸餾水1000ml。

2。 醋酸緩沖液PH4。

65,A液：醋酸鈉13。5g加蒸餾水至500ml。

B液：冰醋酸6ml蒸餾水至500ml。 取A液24ml,B液26ml混合至PH4。

65。 3。

醋酸緩沖液PH4。3。

用2液調(diào)PH至4。3。

孵育液： 取巴比妥鈉液（PH9。4）10ml加三磷酸腺甘鈉鹽20mg。

結(jié)果： PH值 纖 維 類 型 I IIA IIB IIC 10。 4 灰或白 黑 黑 黑 4。

65 黑 白 灰或黑 黑 4。3 黑 白 白或灰 深灰 ----------------------------------------------- 巴比妥鈉能影響Ca2+-ATPase活性，對實(shí)驗(yàn)最后一步硫化胺沉淀顯色很重要。

另外，蔗糖溶液是為了保持更好的滲透壓，讓細(xì)胞原始形狀保持更好，PBS應(yīng)該不如蔗糖好。

4.免疫組化實(shí)驗(yàn)染色的注意事項(xiàng)及影響因素有哪些

免疫組化染色影響因素

影響免疫組化染色質(zhì)量的因素有很多，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意組織的取材和固定，選擇質(zhì)量好的商品化抗體，恰當(dāng)?shù)剡x擇和使用封閉和抗原修復(fù)手段，嚴(yán)格的技術(shù)操作和對照等。

1。假陰性反應(yīng)可發(fā)生在：

1） 組織內(nèi)待測抗原已被分解破壞，或抗原含量過低；

2） 抗原被遮蓋，多由于醛類固定劑的使用，使組織中的大分子蛋白借醛鍵形成交聯(lián)而遮蓋待檢抗原；

3） 抗體質(zhì)量不佳或稀釋度不當(dāng)；

4） 技術(shù)操作失誤等。

2.假陽性反應(yīng)可發(fā)生在：

1） 抗體與非待檢抗原發(fā)生交叉反應(yīng)，在使用多克隆抗體時易出現(xiàn)；

2） 組織對抗體的非特異性吸附，特別是在有大片組織壞死或組織中有較多富于蛋白的液體時容易發(fā)生；

3） 內(nèi)源性過氧化酶的作用，在脾臟、骨髓及一些炎性病變組織的染色中易出現(xiàn)；內(nèi)源性堿性磷酸酶的作用，特別是腸黏膜上皮和腎近曲小管的刷狀緣有高濃度的堿性磷酸酶，若處理不徹底，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

4） 判斷失誤，將腫瘤組織中殘留的正常組織的免疫組織化學(xué)陽性信號誤認(rèn)為是腫瘤的染色反應(yīng)；

5） 當(dāng)腫瘤浸潤破壞正常組織時，使被破壞的正常細(xì)胞胞漿內(nèi)的可溶性蛋白釋放，后者被腫瘤細(xì)胞非特異吸附或吞噬，使瘤細(xì)胞出現(xiàn)該種抗原的陽性反應(yīng)；⑥外源性和內(nèi)源性色素的干擾。

5.簡單染色發(fā)中各種步驟的注意事項(xiàng)是什么

革蘭染色過程所用四種不同溶液和作用： 1、堿性染料：這在簡單染色中已討論過，此處用結(jié)晶紫. 2、媒染劑：其作用是增強(qiáng)染料與細(xì)菌的親和力，更好地加強(qiáng)染料與細(xì)胞的結(jié)合.常用的媒染劑是碘液. 3、脫色劑：幫助染料從被染色的細(xì)胞中脫色.利用細(xì)菌對染料脫色的難易程度不同，而將細(xì)菌加以區(qū)分.革蘭陽性細(xì)菌不易被脫色劑脫色，而革蘭陰性細(xì)菌則易被脫色.常用的脫色劑是丙酮或乙醇，這里所用的是95%的乙醇. 4、復(fù)染液：也是一種堿性染料，目的是使脫色的細(xì)菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進(jìn)行比較.這里用的是蕃紅花紅溶液. 革蘭染色的實(shí)驗(yàn)步驟 1.涂片：左手持菌液試管，右手持接種環(huán)，用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中取一環(huán)菌，于載玻片中央涂成薄層（事先在背面做好標(biāo)記圓圈）即可，或先滴一小滴無菌水于載玻片中央，用接種環(huán)從斜面上挑出少許，與載玻片上的水滴混合均勻，涂成一薄層. 拔或塞試管塞時，應(yīng)將試管口通過火焰略加燒灼，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌. 2.干燥：涂片后在室溫下自然干燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速干燥，但勿靠近火焰. 3.固定：常用高溫進(jìn)行固定.即手持載玻片一端，標(biāo)本面朝上，在燈的火焰外側(cè)快速來回移動3~4次，共約3~4秒.要求玻片溫度不超過60℃，以玻片背面觸及手背皮膚不覺過燙為宜，放置待冷后染色. 固定的目的是： ① 殺死微生物，固定其細(xì)胞結(jié)構(gòu)； ② 保證菌體能牢固地粘附在載玻片上，以免水洗時被水沖掉； ③ 改變菌體對染料的通透性，一般死細(xì)胞原生質(zhì)容易著色. 4.染色：將固定好的涂片放于報紙上，每次滴加一滴染液進(jìn)行染色. 注意：乙醇脫色時滴加乙醇至流出液為無色立即進(jìn)行水洗； 蕃紅復(fù)染由于時間較長，應(yīng)在染液干燥前補(bǔ)加染液； 鏡檢時吸水注意不要擦標(biāo)本. 革蘭染色的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象 如果將細(xì)菌做革蘭染色，凡染后菌體呈藍(lán)紫色的，稱為“革蘭陽性菌”；菌體是伊紅色，稱“革蘭陰性菌”.無論陽性菌還是陰性菌，都有桿菌和球菌.葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌是臨床最為常見的病原菌，葡萄球菌屬于革蘭陽性菌，大腸桿菌屬于革蘭陰性菌中的腸桿菌科，除大腸桿菌以外，臨床較常見的腸桿菌科細(xì)菌還有變形桿菌屬，沙門菌屬、克霉白菌屬；銅綠假單胞菌是臨床常見的較耐藥革蘭陰性桿菌.。

6.革蘭氏染色的注意事項(xiàng)

用途：用于細(xì)菌革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)

成分：

結(jié)晶紫染色液（每瓶）：

結(jié)晶紫 0. 1g

95%乙醇 2mL

1%草酸銨水溶液 8mL

革蘭氏碘液（每瓶）：

碘 0.033g

碘化鉀 0.067g

蒸餾水 10mL

脫色酒精（每瓶）：

95%酒精 10mL

沙黃復(fù)染液（每瓶）：

沙黃 0.025g

95%乙醇 1mL

蒸餾水 9mL

使用方法：

1.將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液。染1min，水洗。

2.用空瓶裝所需的革蘭氏碘液，臨用時滴加革蘭氏碘液，作用1min。水洗。。用剩碘液應(yīng)及時再裝回棕色玻璃瓶中。

3.滴加脫色酒精，約30s；或?qū)⒚撋凭螡M整個涂片，立即傾去，再用95%酒精滴滿整個

涂片，脫色10s。

4.水洗，滴加沙黃復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗，待干，鏡檢。

結(jié)果：

革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

貯存：常溫避光（可放回原包裝盒）

規(guī)格：10ml*4瓶/盒

7.普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌的簡單染色法實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有哪些

由于細(xì)菌體積小且透明，在活體細(xì)胞內(nèi)又含有大量的水分，因此，對光線的吸收和反射與水溶液相差不大。

當(dāng)把細(xì)菌懸浮在水滴內(nèi)，放在顯微鏡下觀察時，由于與周圍背景沒有顯著的明暗差，難于看清它們的形狀，更談不上識別其細(xì)微結(jié)構(gòu)。而經(jīng)過染色，就可借助顏色的反襯作用比較清楚地看到菌體形態(tài)，亦即菌體表面及內(nèi)部結(jié)構(gòu)著色與背景形成鮮明對比，這樣便可在下清晰地觀察到微生物的形狀和結(jié)構(gòu)，而且還可以通過不同的染色反應(yīng)來鑒別微生物的類型和區(qū)分死、活細(xì)菌等，因此，染色技術(shù)是觀察細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要手段。