檢測細胞活力的實驗方法(細胞活力測定的方法)

1.細胞活力測定的方法有哪些

根據(jù)每個細胞有一定的重量而設計的。

它可以用于單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來，經洗滌，再離心后直接稱重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過濾后用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱重求出濕重。

不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內，于105℃烘干至恒重，取出放入干燥器內冷卻，再稱量，求出微生物干重。如果要測定固體培養(yǎng)基上生長的放線菌或絲狀真菌，可先加熱至50℃，使瓊脂熔化，過濾得菌絲體，再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲，然后按上述方法求出菌絲體的濕重或干重。

除了干重、濕重反映細胞物質重量外，還可以通過測定細胞中蛋白質或DNA的含量反映細胞物質的量。蛋白質是細胞的主要成分，含量也比較穩(wěn)定，其中氮是蛋白質的重要組成元素。

從一定體積的樣品中分離出細胞，洗滌后，按凱氏定氮法測出總氮量。蛋白質含氮量為16%，細菌中蛋白質含量占細菌固形物的50%一80%，一般以65%為代表，有些細菌則只占13%一14%，這種變化是由菌齡和培養(yǎng)條件不同所產生的。

因此總含氮量與蛋白質總量之間的關系可按下列公式計算：蛋白質總量=含氮量*6.25核酸DNA是微生物的重要遺傳物質，每個細菌的DNA含量相當恒定，平均為8.4*`10^(-5)`NG。因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取DNA，求得DNA含量，再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數(shù)。

2.如何選用細胞活力的測試方法

細胞活性測定方法有臺盼藍染色法、克?。洌┬纬煞?、3H 放射性同位素摻入法、MTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡便，不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點而得到廣泛的應用。

但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的，需要加有機溶劑溶解，由于在去上清操作時會有可能帶走小部分的 Formazan ，故有時重復性略差。為了解決這個問題，研究人員又開發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如 XTT 、CCK-8 ( WST-8 )等。