神經(jīng)生物學研究的常用方法
神經(jīng)科學的發(fā)展與的研究方法的進步密切相關(guān)??傮w上,神經(jīng)生物學的研究方法有六大類:形態(tài)學方法、生理學方法、電生理學方法、生物化學方法、分子生物學方法及腦成像技術(shù)。
7.1 形態(tài)學方法
神經(jīng)生物學研究中常用的形態(tài)學方法有束路追蹤、免疫組化和原位雜交,其他還有受體定位、神經(jīng)系統(tǒng)功能活動形態(tài)定位等方法。
7.1.1 束路追蹤法
追蹤神經(jīng)元之間的聯(lián)系是神經(jīng)解剖學研究中的重大目標,它對研究神經(jīng)元的功能、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和成熟都具有重要意義。這種方法學的建立始于19世紀末的逆行和順性潰變(順行潰變指胞體或軸突損傷后的軸突終末的潰變,逆行潰變指去除靶區(qū)之后神經(jīng)元胞體的潰變)研究。20世紀40年代主要手段是鍍銀染色法,根據(jù)變性纖維的形態(tài)變化來判斷變性纖維。20世紀50年代發(fā)展了Nanta法,能遏制正常纖維的染色而僅鍍?nèi)境鲎冃岳w維。但該法不易顯示細纖維,1971年Kristenson等將辣根過氧化物酶(HRP)注入幼鼠的腓腸肌及舌肌結(jié)果在脊髓和延腦的相應(yīng)部分運動神經(jīng)元胞體內(nèi)發(fā)現(xiàn)HRP的積累 。不久LaVail正式使用HRP作為軸突逆行追蹤,以后遂廣泛應(yīng)用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的研究。HRP可被神經(jīng)末梢、胞體和樹突吸收,軸突損傷部分也可攝入。在胞體內(nèi),HRP的活性可持續(xù)4~5天,在溶酶體內(nèi)對聯(lián)苯胺呈陽性反應(yīng)而顯現(xiàn)出來。被標記的神經(jīng)元可以清晰的顯示胞體、樹突及軸突。
除了HRP標記法,還有熒光物質(zhì)標記法、毒素標記法、注射染料等方法。
7.1.2 免疫組織化學
免疫組織化學術(shù)是應(yīng)用抗原與抗體結(jié)合的免疫學原理,檢測細胞內(nèi)多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布。這種方法特異性強,敏感度高,進展迅速,應(yīng)用廣泛,成為生物學和醫(yī)學眾多學科的重要研究手段。近年隨著純化抗原和制備單克隆抗體的廣泛開展以及標記技術(shù)不斷提高,免疫組織化學的進展更是日新月異,不僅用于許多基本理論的研究,并取得重大突破,而且也用于疾病的早期快速診斷等臨床實際。
折疊學科解說八、九十年代,心理學研究者無不關(guān)注兩個蓬勃發(fā)展的認知神經(jīng)科學邊沿交叉學科的研究,即認知神經(jīng)科學和認知行為遺傳學。
這兩個學科吸收了認知科學和行為發(fā)展科學的理論與神經(jīng)科學和遺傳學的新技術(shù),共同向智能的本質(zhì)和意識的起源這一基本的重大理論問題發(fā)起沖擊,將心理學的研究推向了一個新的發(fā)展水平,已經(jīng)并且勢必繼續(xù)對心理學的研究產(chǎn)生重大影響。認知神經(jīng)科學的研究旨在闡明認知活動的腦機制,即人類大腦如何調(diào)用其各層次上的組件,包括分子、細胞、腦組織區(qū)和全腦去實現(xiàn)各種認知活動。
傳統(tǒng)神經(jīng)科學的某些分支,例如神經(jīng)心理學、心理生理學、生理心理學、神經(jīng)生物學和行為藥理學等,吸收了認知科學的理論和神經(jīng)科學的新技術(shù),逐漸形成了認知神經(jīng)心理學、認知心理生理學、認知生理心理學、認知神經(jīng)生物學和計算神經(jīng)科學等認知神經(jīng)科學的各個分支。自八十年代后期發(fā)端以來,認知神經(jīng)科學的研究在短短時間內(nèi)取得了令人注目的進展,對傳統(tǒng)認知心理學和發(fā)展心理學的理論建構(gòu)和各內(nèi)容領(lǐng)域的研究有著巨大影響。
認知發(fā)展研究自然也不例外,由于認知發(fā)展心理學和發(fā)展神經(jīng)科學科學對許多共同問題感興趣,由此衍生出來的發(fā)展認知神經(jīng)科學正得到越來越多人的關(guān)注,成為當前最熱門的交叉研究領(lǐng)域之一。折疊學科分支認知科認知神經(jīng)科學學的核心學科分支--認知心理學、心理語言學、人工智能和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的研究都取得了重要進展,但又都發(fā)現(xiàn)在自己的研究領(lǐng)域內(nèi)出現(xiàn)許多難點,必須在人腦認知活動機制中需求答案。
例如,認知心理學和心理語言學研究中,信息加工的并行和串行方式,外顯機制和內(nèi)隱機制,基于經(jīng)驗和知識的認知活動和靠靈感、頓悟的認知活動,其腦機制有何異同?在人工智能和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的研究中,物理符號的離散表征和運算原理,與亞符號連續(xù)運算原理之間存在何種關(guān)系?人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的學習機制為何需要千萬次訓練,而人類的觀察模仿學習則一看就會?這些問題都尖銳提到認知科學各個分支學科發(fā)展面前。人類社會發(fā)展對智能信息系統(tǒng)越來越高的要求和技術(shù)難題之間的矛盾,使認知科學迫切希望有一個新生兒來繼承自己未竟的事業(yè)。
生物醫(yī)學構(gòu)像技術(shù)特別是近年功能性磁共振成像可以用于對于人類認知活動的研究;腦事件相關(guān)電位、腦磁圖和高分辨腦成像等生理學方法,可以為人腦認知功能研究提供許多新的數(shù)據(jù);分子神經(jīng)生物學和細胞神經(jīng)科學,為人腦認知障礙和動物認知行為提供腦內(nèi)機制的許多科學數(shù)據(jù),包括動物的學習障礙和某些基因序列的關(guān)系。這些都使神經(jīng)科學有資格孕育一個徑直研究認知活動腦機制的新學科。
傳統(tǒng)神經(jīng)科學的某些分支,吸收了認知科學的理論和神經(jīng)科學的新技術(shù),就可以成為新學科分支的組成部分。神經(jīng)心理學、心理生理學、生理心理學、神經(jīng)生物學、行為藥理學等都是這些傳統(tǒng)神經(jīng)科學的分支。
一經(jīng)吸收了認知科學和神經(jīng)科學新理論和新技術(shù),這些傳統(tǒng)學科得到新生,于是,認知神經(jīng)心理學、認知生理心理學、認知心理生理學、認知神經(jīng)生物學、計算神經(jīng)科學等逐漸形成。雖然認知科學和神經(jīng)科學的興起只有20 多年的短暫歷史,由于其高度跨學科性與高新技術(shù)發(fā)展的密切相關(guān),兩者又結(jié)合在一起,形成了新的交叉領(lǐng)域---認知神經(jīng)科學。
在世紀之交,可以預(yù)見這一領(lǐng)域的發(fā)展將會帶動整個科學的發(fā)展,并能順應(yīng)發(fā)展教育事業(yè)的理論需求。下列研究已經(jīng)形成或正在形成國際前沿。
折疊實驗內(nèi)容腦的認知功能包括知覺、注意、記憶、語言和思維以及智能和意識認知神經(jīng)科學等心理功能。一百多年來,神經(jīng)生理學家和解剖學家一直按機能定位的指導思想試圖尋找各種認知功能的特異腦中樞。
60 年代在治療頑固癲癇的腦手術(shù)病人中,發(fā)現(xiàn)了大腦兩半認知風格的差異和海馬的記憶功能,曾極大地鼓舞了高級功能定位論的研究,認為海馬是特異的記憶中樞,左半球負責抽象思維,右半球負責形象思維等。然而,即使這類研究的奠基人和大腦半分工說的創(chuàng)始人,也很快陷入迷惘之中。
因為總是存在大量矛盾的科學事實。還在70 年代中期,我們就試圖以"功能模塊"的概念取代定位論或分工說。
經(jīng)過十多年的努力,神經(jīng)病學家和心理學家們終于采用雙分離方法學原則,發(fā)現(xiàn)了人腦功能模塊性或多重功能系統(tǒng),主要突破表現(xiàn)在多重記憶模塊和復雜的認知功能系統(tǒng)。神經(jīng)生理學家在猴等動物的實驗研究中,也積累了大量科學事實,證明視覺功能存在著背、腹側(cè)系統(tǒng),至少是枕、頂、顳、額的30 多個腦皮層區(qū)動態(tài)活動。
目前,物體真實運動和似動知覺之間、幻覺和真實知覺之間、外界引起和主動性選擇注意之間的腦功能模塊的異同是引起普遍關(guān)注的研究課題。認知神經(jīng)科學折疊意識與無意識的腦機制過去20 年間,運用雙分離原則,已將記憶至少分離出意識和無意識兩類多重記憶系統(tǒng),在這些研究成果之上,近年涌現(xiàn)出意識的"全腦工作空間模型" 、"簇化模型"、復雜性模型"等,對意識與無意識過程進行了更為系統(tǒng)性的實驗研究及對外界客體的真實知覺和想像之間的腦功能模塊的對比研究等,這種對比性分離研究,將會對腦高級功能的認識更加深入。
這類研究一。
認知神經(jīng)科學常用的研究方法
認知神經(jīng)科學包括兩大類互補的研究方法:一類是無創(chuàng)性腦功能(認知)成像技術(shù),另一類清醒動物認知生理心理學研究方法。前一類方法中又分為腦代謝功能成像和生理功能成像兩種;后一類方法中包括單細胞記錄、多細胞記錄、多維(陣列)電極記錄法和其他生理心理學方法(手術(shù)法、冷卻法、藥物法等)。盡管這些方法為人類科學增添了許多光彩,但遠未滿足認知神經(jīng)科學研究的要求。例如,腦認知成像技術(shù)可以為我們對認知過程的腦功能形成直觀的圖像,然而這種圖像僅可提供結(jié)構(gòu)或區(qū)域性功能關(guān)系,對于細胞水平的機制顯得過分粗糙。由上述可見,作為當代心理學研究熱點的認知神經(jīng)科學,是否能夠繼續(xù)閃現(xiàn)光輝,有待于進一步的歷史驗證。
而獲取神經(jīng)干細胞只有三個途徑,一種是通過胚胎提取,也就是從流產(chǎn)的胎兒身上抽取獲得干細胞;二是通過克隆,通過抽取動物的細胞注入卵母細胞,培植成干細胞;三則是從自身抽取骨髓,然后加入各種誘導因子,在進行一些基因的改造和修飾,定向誘導分化成神經(jīng)干細胞。而前兩種獲取方式會帶來倫理道德方面的置疑,而且從技術(shù)層面上來說難度也太大。所以從骨髓中進行神經(jīng)干細胞的培養(yǎng),不僅技術(shù)方面相對比較成熟,實驗的效果和可靠性也比前兩種要更明顯。
后來應(yīng)腦癱、腦外傷和腦血管瘤三位志愿者患者的家屬強烈要求,研究人員對他們進行了神經(jīng)干細胞移植手術(shù),療效目前還正處于觀察之中。如果一切順利的話,不久之后就可以在臨床中普通的推廣應(yīng)用了。
神經(jīng)干細胞移植是國際上的一種研究方向,很多研究神經(jīng)干細胞移植領(lǐng)域的專家、學者,對“神經(jīng)干細胞移植”目前的研究的狀況以及發(fā)展前景都抱有很大的期望,都希望在短時間內(nèi)能有更大的突破。而對于發(fā)病率居高不下的偏癱患者來說,如果神經(jīng)干細胞移植獲得突破并用于臨床,實則算得上一項造福人類的研究成果。
神經(jīng)組織具有接受刺激,產(chǎn)生神經(jīng)沖動并傳導神經(jīng)沖動的功能。
它由神經(jīng)細胞(又稱神經(jīng)元)和神經(jīng)膠質(zhì)細胞組成。每個神經(jīng)元都由胞體和突起兩部分組成。
突起分為樹突和軸突兩種。樹突的功能是接受刺激,并傳導神經(jīng)沖動給胞體。
每個神經(jīng)元只有一個軸突,軸突的功能是將神經(jīng)沖動從胞體傳遞給予它聯(lián)系的神經(jīng)元或效應(yīng)器的細胞。神經(jīng)膠質(zhì)細胞數(shù)量比神經(jīng)元多,起支持、絕緣、營養(yǎng)、保護和修復等作用。
膠質(zhì)細胞間無突觸聯(lián)系,不能傳導神經(jīng)沖動。神經(jīng)纖維是由神經(jīng)元的軸突或長樹突,外包神經(jīng)膠質(zhì)細胞所構(gòu)成,它分為有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維兩種。
神經(jīng)是大量平行的神經(jīng)纖維集合成束而構(gòu)成的。
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