測量藥材含量的方法(高效液相色譜法測定中藥含量采用的方法)

1.高效液相色譜法測定中藥含量采用的方法有哪些

遵照下面的要求選擇合適的方法，HPLC法外標(biāo)、內(nèi)標(biāo)兩種，檢測器一般UV即可。

含量測定分析方法驗證的可接受標(biāo)準(zhǔn)簡介

摘要：本文介紹了在對含量測定所用的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗證時，各項指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。

關(guān)鍵詞：含量測定 分析方法驗證 可接收標(biāo)準(zhǔn)

在進(jìn)行質(zhì)量研究的過程中，一項重要的工作就是要對質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所涉及到的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗證，以保證所用的分析方法確實能夠用于在研藥品的質(zhì)量控制。為規(guī)范對各種分析方法的驗證要求，我國已于2005年頒布了分析方法驗證的指導(dǎo)原則。該指導(dǎo)原則對需要驗證的分析方法及驗證的具體指標(biāo)做了比較詳細(xì)的闡述。但是文中未涉及各具體指標(biāo)在驗證時的可接受標(biāo)準(zhǔn)，國際上已頒布的指導(dǎo)原則中也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的要求。另一方面，大多數(shù)藥品研發(fā)單位在進(jìn)行質(zhì)量研究時，已逐步認(rèn)識到分析方法驗證的必要性與重要性，大都也在按照指導(dǎo)原則的要求進(jìn)行分析方法驗證，但驗證完后卻因沒有一個明確的可接受標(biāo)準(zhǔn)，而難以判斷該分析方法是否符合要求。本文結(jié)合國外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對含量測定方法進(jìn)行驗證時的可接受標(biāo)準(zhǔn)，供國內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進(jìn)行研究時參考。

1.準(zhǔn)確度

該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配制濃度為80%、100%和120%的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個回收率數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。

2.線性

線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：

在80%至120%的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998,Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

3.精密度

1）重復(fù)性

配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

2）中間精密度

配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

4.專屬性

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測器進(jìn)行純度分析時，主峰的純度因子應(yīng)大于980。

5.檢測限

主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。

6.定量限

主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

7.耐用性

分別考察流動相比例變化±5%、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、流速相對值變化±20%時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

8、系統(tǒng)適應(yīng)性

配制6份相同濃度的供試品溶液進(jìn)行分析，主峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

2.中藥制劑分析用于總成分的含量測定方法有哪些

中藥制劑分析用于總成分的含量測定方法有：

1、化學(xué)分析法： 包括重量分析法和滴定分析法， 可以測定： 總生物堿、總有機(jī)酸、總皂苷及礦物藥成分等。

2、分光光度法： 用于總皂苷、總生物堿、總黃酮的測定。

滴定分析

根據(jù)滴定所消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和體積以及被測物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)溶液所進(jìn)行的化學(xué)反應(yīng)計量關(guān)系，求出被測物質(zhì)的含量，這種方法被稱為滴定分析法。

擴(kuò)展資料

試劑等級

一級品 即優(yōu)級純

1、一級品 即優(yōu)級純，又稱保證試劑（符號G.R.），我國產(chǎn)品用綠色標(biāo)簽作為標(biāo)志，這種試劑純度很高，適用于精密分析，亦可作基準(zhǔn)物質(zhì)用。

二級品 即分析純

2、二級品 即分析純，又稱分析試劑（符號A.R.），我國產(chǎn)品用紅色標(biāo)簽作為標(biāo)志，純度較一級品略差，適用于多數(shù)分析，如配制滴定液，用于鑒別及雜質(zhì)檢查等。

三級品 即化學(xué)純

3、三級品 即化學(xué)純，（符號C.P.），我國產(chǎn)品用藍(lán)色標(biāo)簽作為標(biāo)志，純度較二級品相差較多，適用于工礦日常生產(chǎn)分析。

四級品 即實驗試劑

4、四級品 即實驗試劑（符號L.R.），雜質(zhì)含量較高，純度較低，在分析工作常用輔助試劑（如發(fā)生或吸收氣體，配制洗液等）。

基準(zhǔn)試劑

5、基準(zhǔn)試劑 它的純度相當(dāng)于或高于保證試劑，通常專用作容量分析的基準(zhǔn)物質(zhì)。稱取一定量基準(zhǔn)試劑稀釋至一定體積，一般可直接得到滴定液，不需標(biāo)定，基準(zhǔn)品如標(biāo)有實際含量，計算時應(yīng)加以校正。

光譜純試劑

6、光譜純試劑（符號S.P.） 雜質(zhì)用光譜分析法測不出或雜質(zhì)含量低于某一限度，這種試劑主要用于光譜分析中。

7、色譜純試劑 用于色譜分析。

8、生物試劑用于某些生物實驗中。

9、超純試劑 又稱高純試劑。

參考資料來源：百度百科-化學(xué)分析法

3.藥物中測定某物質(zhì)含量的常用方法有那些

方法的驗證： 訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測定法不同于一般質(zhì)量考察的方法，須經(jīng)過嚴(yán)格的方法學(xué)驗證，不同原理的測定法具有不同的驗證內(nèi)容及要求：

(1)容量分析法的驗證：①精密度：用原料藥精制品考察方法精密度，平行試驗5個樣本的RSD≤0.2%；②準(zhǔn)確度：以測定原料精制品（含量>99.5%）的回收率（測定值與理論值的比值）計算，應(yīng)在99.7%~100.3%之間（n=5,RSD≤0.1%）；③滴定終點確定的依據(jù)：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終點，應(yīng)用電位法校準(zhǔn)終點顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對比結(jié)果；④耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時間等）有微小變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應(yīng)在方法中注明。

(2)HPLC法的驗證：①精密度：RSD≤2%(n=5)；②準(zhǔn)確度：用于制劑時，要考察輔料的影響，將一定量藥物加到按處方比例配制的輔料中（為標(biāo)示量的80%~120%）制成高、中、低三個劑量，混合均勻后，每個劑量取三份樣品，按擬定方法測定回收率，應(yīng)在98%~102%之間（n=9, RSD≤2%）。③線性范圍：用已知含量的精制品配制一系列濃度的溶液（n=5~7），用濃度C對峰面積A或峰高h(yuǎn)或被測物的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸處理，線性方程的相關(guān)系數(shù)r≥0.999，截距應(yīng)趨于零，并提供線性關(guān)系圖；④專屬性：輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物峰對主藥峰應(yīng)無干擾；⑤耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、流動相組成和pH值、不同品牌或批號的同類色譜柱、柱溫、流速、樣品提取次數(shù)、時間等）有微小變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應(yīng)在方法中注明；⑥靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。

(3)UV法的驗證：①精密度：RSD≤1%(n=5)；②準(zhǔn)確度：方法同HPLC法，回收率應(yīng)在98%~102%之間（n=9, RSD≤2%），同時要求輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物在測定波長處無吸收。③線性范圍：用已知含量的精制品配制一系列濃度的溶液（n=5~7，吸收度A在0.2~0.7間），用濃度C對峰面積A或峰高h(yuǎn)或被測物的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸處理，線性方程的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.999，截距應(yīng)趨于零，并提供線性關(guān)系圖；④耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時間、比色法中顯色劑用量、反應(yīng)溫度、時間、pH值等）有微小變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應(yīng)在方法中注明；⑤靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。

吸收度A在0.2~0.8間其線形關(guān)系好，利用標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線后，受測溶液做適當(dāng)?shù)南♂專蛊湮斩仍?.2~0.8，如果太小或太大，都將影響測定的準(zhǔn)確性的。

4.中草藥中生物堿含量測定方法有哪些

中草藥中生物堿的含量測定一般包括三個步驟——提取、分離精制與含量測定。

現(xiàn)將常用方法筒述如下： 1。提取： 稱取一定量的藥材，根據(jù)生物堿的溶解性能堿化后用有機(jī)溶劑提取或用酸水或用乙醇提取得游離生物堿或其鹽類。

提取方法用冷浸法、滲漉法、口流提取法、離子交換法均可。 2。

分離精制： 多用溶劑法。利用生物堿在酸水中成鹽，不溶于有機(jī)溶劑，堿化后游離易溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，反復(fù)于分液漏斗中萃取精制。

有時亦可加某些試劑使雜質(zhì)沉淀而除去或用氧化鋁柱層析法去除雜質(zhì)。 3。

含量測定： 以容量法應(yīng)用最多，亦可用重量法、比色法、可見光與紫外光分光光度法、層析法等。 容量法中又以酸堿滴定法較簡便常用。

即將用上述方法提取精制所得之生物堿溶于過量標(biāo)準(zhǔn)酸溶液中，用標(biāo)準(zhǔn)堿液回滴，從消耗的酸量算出生物堿的含量。 如果中草藥中所含生物堿不止一種，則測得的為總生物堿含量，而以其中主要生物堿為代表計算的近似值。

如需準(zhǔn)確地測定某一生物堿的含量，則應(yīng)分離得個別生物堿后再行測定。

5.中藥材的鑒定方法主要包括哪幾種

1、看藥材的表面。不同種類的藥材由于用藥部位的不同，其外形特征會有所差異。如根類藥材多為圓柱形或紡錘形，而根莖類藥材都有較多的莖痕，皮類藥材則多為卷筒狀，等等。另外，一些藥材有著它們自己特定的表面特征，或光華、或粗糙、或長有鱗葉、皮孔、茸毛和突起等。比如海馬的外形就被總結(jié)成為“馬頭蛇尾瓦楞身”，羚羊角長有“通天眼”，防風(fēng)長有“蚯蚓頭”等。這些特征都是鑒別道地藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣的重要依據(jù)。

2、看顏色。藥材顏色的不同或變化，不僅與它的品種和本身的質(zhì)量有關(guān)，不適當(dāng)?shù)募庸ず蛢Σ胤椒ㄒ矔苯佑绊懰幉牡纳珴桑虼祟伾氰b別藥材的重要因素。我們可以通過對藥材外表顏色的觀察，分辨出藥材的品種、產(chǎn)地和質(zhì)量的好壞。比如，黃連色要黃，丹參色要紅，玄參色偏黑等。

3、看斷面。無論植物也好，動物也好，都是由一層層的組織器官構(gòu)造而成的，當(dāng)藥材被切開，這一層層的構(gòu)造就會清晰地展現(xiàn)出來，就像古樹的年輪一樣。很多藥材的斷面都具有明顯的特征，而這些特征就是藥材內(nèi)部構(gòu)造的直接體現(xiàn)。我們可以清楚的看見各種分層、紋路和不同形狀的小點。比如在防己斷面上能看見明顯的車輪紋理，而黃芪的折斷面紋理呈“菊花心”樣，杜仲在折斷時更有膠狀的細(xì)絲相連，等等。這些獨有的斷面特征是鑒別藥材的重要依據(jù)。

用手感受藥材的軟硬、輕重，疏松還是致密，光滑還是粘膩，細(xì)致還是粗糙，以此鑒別藥材的好壞。不同藥材的質(zhì)感是不一樣的，即使是同一種藥材，由于加工炮制的方法不同，也會有較大的差異。如荊三棱堅實體重，而泡三棱則體輕；鹽附子質(zhì)軟，而黑附子則質(zhì)地堅硬。

三、口嘗和鼻聞。

藥材的氣味與其所含的成分有關(guān)，鼻聞是比較重要的鑒別方法，尤其對于鑒別一些有濃郁氣味的藥材是很有效的，如薄荷的香、魚腥草的腥、阿魏的臭等等。口嘗法鑒別藥材的意義不僅在于味道還包括“味感”，味分為辛、甘、酸、苦、咸五味，如山楂的酸、黃連的苦、甘草的甜等。味感則分為麻、澀、淡、滑、涼、膩等。藥材的味感和所含的化學(xué)物質(zhì)也有密切關(guān)系，在中藥材口嘗鑒別的實踐中，可按藥材的品種和質(zhì)量分類進(jìn)行判斷。

四、水試和火試。

有些藥材放在水中，或用火燒灼一下會產(chǎn)生特殊的現(xiàn)象。如熊膽的粉末放在水中，會先在水面上旋轉(zhuǎn)，然后成黃線下沉而不會擴(kuò)散。麝香被燒灼時，會產(chǎn)生濃郁的香氣，燃盡后留下白色的灰末。這些特殊的現(xiàn)象都與藥材內(nèi)所含的化學(xué)成分有密切的關(guān)系，是常用的鑒別方法。