測定微生物計數(shù)的方法有很多,主要有以下幾種:
1.血細胞計數(shù)法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數(shù)板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數(shù),并求出每個小格所含細菌的平均數(shù),再以此為依據(jù),估算總菌數(shù).
①此法的缺點是不能區(qū)分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數(shù).
③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化
2.稀釋涂布平板法
原理:每個活細菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目
②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統(tǒng)計結果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定.但不適于測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養(yǎng)體等.
④此法若不培養(yǎng)成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上,經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計數(shù),這樣又稱涂片計數(shù)法.染色可用臺盼藍,臺盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數(shù)死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數(shù)很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然后將濾膜干燥、染色,并經(jīng)處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積上)的細菌數(shù).
此法也可以通過培養(yǎng)觀察形成的菌落數(shù)來推算樣品中的菌數(shù).例如測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目:將已知體積的水過濾后,將濾膜放在伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng).在該培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色,可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目,計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目.
此法也是統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內(nèi),菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi),否則不準確.
5.顯微鏡直接計數(shù)法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中“除了上述活菌計數(shù)法外,顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法.”這里說的顯微鏡直接計數(shù),我認為應該是在稀釋涂布的基礎上不培養(yǎng)成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數(shù).再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數(shù)法發(fā)展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統(tǒng)計微生物的數(shù)目.
微生物檢驗方法標準 1 食品微生物學檢驗 總則 GB 4789.1-2010 2 菌落總數(shù)測定 GB 4789.2-2010 3 大腸菌群計數(shù) GB 4789.3-2010 4 沙門氏菌檢驗 GB 4789.4-2010 5 金黃色葡萄球菌檢驗 GB4789.10-2010 6 霉菌和酵母計數(shù) GB4789.15-2010 7 乳與乳制品檢驗 GB4789.18-2010 8 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗 GB4789.30-2010 9 乳酸菌檢驗 GB 4789.35-2010 10 阪崎腸桿菌檢驗 GB4789.40-2010 11 志賀氏菌檢驗 GB 4789.5-2012 12 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗 GB4789.13-2012 13 雙歧桿菌的鑒定 GB4789.34-2012 14 大腸埃希氏菌計數(shù) GB 4789.38-2012 15 副溶血性弧菌檢驗 GB4789.7-2013 16 商業(yè)無菌檢驗 GB4789.26-2013 17培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求 GB4789.28-2013 18沙門氏菌、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌的腸桿菌科噬菌體診斷檢驗 GB 4789.31-2013 19 糞大腸菌群計數(shù) GB 4789.39-2013 20 空腸彎曲菌檢驗 GB4789.9-2014 21 β型溶血性鏈球菌檢驗 GB4789.11-2014 22 蠟樣芽孢桿菌檢驗 GB4789.14-2014 23小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗 GB4789.8-2016 24 腸桿菌科檢驗 GB4789.41-2016。
原發(fā)布者:jxc2520
食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定一、培養(yǎng)基和試劑1、平板計數(shù)瓊脂(platecountagar,PCA)培養(yǎng)基成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000mLpH7.0±0.2制法:將上述成分加于蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH。分裝試管或錐形瓶,121℃高壓滅菌15min。2、磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀(KH2PO4)34.0g蒸餾水500mLpH7.2制法:貯存液:稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中,用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH,用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15min。3、無菌生理鹽水成分氯化鈉8.5g蒸餾水1000mL制法:稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中,121℃高壓滅菌15min。二、操作步驟樣品的稀釋1、固體和半固體樣品:稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1:10的樣品勻液。2、液體樣品:以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量
統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法有直接計數(shù)法 和間接計數(shù)法兩種。
1. 直接計數(shù)法
直接計數(shù)法是將稀釋的樣品滴在計 數(shù)板上,蓋上蓋玻片,然后在顯微鏡下計 數(shù)4?5個中格的細菌數(shù),并求出每個小 格所含細菌的平均數(shù),再按公式求出每 毫升樣品中所含的細菌數(shù)。計算公式 為:每毫升原液所含細菌數(shù)=每小格平 均細菌數(shù)X400X1 000X稀釋倍數(shù)。這 種方法的優(yōu)點是所需設備比較簡單,能 迅速得到結果,而且在計數(shù)的同時還可 以觀察到所研究的微生物的形態(tài)特征; 缺點是不能區(qū)分死菌與活菌。
2. 間接計數(shù)法
在應用稀釋涂布平板法計數(shù)時,首 先要將待測樣品配制成均勻的系列稀釋 液,盡量使微生物細胞分散開,再把稀釋 液接種到平板上,進行培養(yǎng)觀察。但值 得注意的是,統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌 的實際數(shù)目低,而且統(tǒng)計的結果一般用 菌落數(shù)而不用活菌數(shù)來表示。計算公式 為:每克樣品中的菌落數(shù)= (C+V)X M,其中,C表示某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),V表示涂布平板時所 用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋 倍數(shù)。
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