組織常用固定方法(組織和細胞的固定的方法)

1.組織和細胞的固定的方法有哪些

組織和細胞的固定的方法，浸潤法

浸潤法是組織化學(xué)和免疫

組織化學(xué)常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時(shí)也多用此法。

預先需估計固定劑的用量，并在取材前配好固定液，分裝于小容器內，在容器上標記組別和取材時(shí)間。容器內放人記錄組織類(lèi)型的紙條，以便包埋時(shí)辨認。固定液的用量應是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時(shí)間可根據所選固定液和組織類(lèi)型而定。

若進(jìn)行酶組織化學(xué)染色，應在4℃短時(shí)間固定，固定時(shí)間長(cháng)會(huì )導致酶活性減弱，甚至消失。

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2.組織和細胞的固定用什么方法

灌流固定法

此法是經(jīng)血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內，使生活的細胞在原位及時(shí)迅速固定，取下組織之后再浸入相同的固定液內繼續固定。

灌流固定時(shí)大動(dòng)物多采用輸液方式，將固定液從一側頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈輸入，從另一側切開(kāi)靜脈放血，輸入固定液與放血同時(shí)進(jìn)行。固定液的輸人量因個(gè)體不同而異，即500―2000ml不等。

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3.最常用到的幾種組織固定液

(1)中性緩沖甲醛。

該液能夠固定大多數組織結構，對脂類(lèi)有較好的固定效果。免疫組化、原位雜交等試驗都可以使用。

本液還可以長(cháng)時(shí)間存放，是實(shí)驗室常備的固定液之一。固定液浸透較慢，固定時(shí)間不限，浸透之后可以長(cháng)時(shí)間存放（免疫組化和原位雜交標本建議不要這么做）。

美中不足是染色時(shí)酸性染料著(zhù)色不佳，并且本液對糖類(lèi)沒(méi)有固定作用。 （2）AAF。

該液由醋酸（A）、酒精（A）和甲醛（F）為主要成分，廣泛用于動(dòng)植物組織的固定和各種實(shí)驗檢測，植物固定則是首選。固定液滲透均一，速度很快。

固定時(shí)間一般為4 ~ 24 h。此液處理后，染色結果細膩，但酸性染料著(zhù)色力下降。

本液配制后可以短時(shí)間放置。 （3）Bouin。

過(guò)去常用的一種固定液，主要用于軟化皮膚或者富含結締組織的標本，在胚胎標本處理中使用很廣。用本液處理后，酸性染料著(zhù)色鮮艷。

但是，由于含有苦味酸，不能用于原位雜交等實(shí)驗檢測。此外，本液對很多細胞器的破壞較大，尤其不適于固定腎臟標本。

經(jīng)本液固定的標本，尺寸應盡可能小，否則內外固定的效果有所差別。本液可以較長(cháng)時(shí)間存放，但標本在其中不應久存，固定8 ~ 24 h為宜。

（4）Zamboni。用于免疫組化和免疫電鏡的首選固定液。

保存細微結構和抗原特性最好的固定液之一。固定液浸透速度較慢，要求標本不能過(guò)大，常用于血管灌注。

該液可以長(cháng)時(shí)間存放，標本在其中也可以保存較長(cháng)時(shí)間，抗原封閉作用相對較弱。由于含有苦味酸，故不用于原位雜交試驗。

（5）Helly,Susa,Zenker。這是三種比較相近的固定液，含有汞鹽和重鉻酸鉀。

經(jīng)這類(lèi)固定液處理，標本對酸性和堿性染料均有較好的親和能力。染色處理前需要脫汞和脫碘操作。

目前除了幾種傳統染色更鮮艷外，并無(wú)其他優(yōu)勢。

4.固定有哪些方法

(1) 外固定：常用方法有小夾板固定或石膏繃帶固定。

①小夾板 固定：主要適用于四肢長(cháng)骨的較穩定骨折，固定范圍不包括骨折處的上 下關(guān)節，利于早期功能鍛煉。但偶有固定不牢的可能，易使骨折移位、不愈合、畸形愈合，若捆扎過(guò)緊影響肢體血運、發(fā)生遠端缺血。

②石膏 繃帶固定：可按肢體形狀塑形，干固后固定可靠，固定范圍大，不易發(fā)生 再移位，但不利于功能鍛煉。 （2） 持續牽引固定：皮牽引和骨牽引。

骨牽引較直接且力量大，利 于開(kāi)放性傷口觀(guān)察及換藥，利于功能鍛煉，但不能早期下床活動(dòng)；皮牽 引較間接且力量小，多應用于兒童及股骨近端骨折的患者。 （3） 內固定：復位準確且固定牢靠但具有創(chuàng )傷。

內固定器材有多 種，常用的有金屬絲、接骨板、螺絲釘、髓內釘、加壓鋼板等。

5.幾種細胞固定方法

選擇最佳固定液標準是：

(1)最好地保持細胞和組織的形態(tài)結構；

(2)最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細胞化學(xué)技術(shù)中是禁用的；

(3)不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑，如帶有苦味酸的固定劑，還有甲醛升汞固定液，會(huì )使上皮細胞產(chǎn)生非特異性熒光；

(4)固定劑的選擇、固定時(shí)間、溫度和PH值都會(huì )影響實(shí)驗結果。

單純固定液（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能滿(mǎn)足常規HE及免疫組化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后應密封并保存在陰涼處，保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月。

甲醛（40%） 100ml

無(wú)水磷酸氫二鈉 6.5g

磷酸二氫鈉 4.0g

蒸餾水 900ml

(2)乙醇固定液：使用時(shí)以80%-95%的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對組織滲透力較弱，因此很少單獨使用，但其保存組織中的核酸強于中性甲醛，故常用于有核酸操作的實(shí)驗或檢查，假如用于證實(shí)尿酸結晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定組織。

(3)4%多聚甲醛固定液：主要用于培養細胞的固定。

混合固定液（1）乙醇-甲醛（乙醇-福爾馬林，AF）固定液：適用于皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定后的標本可直接入95%乙醇脫水。

甲醛（40%） 100ml

95%乙醇 900ml

(2)B5（醋酸鈉-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴組織。染色前應進(jìn)行脫汞沉淀處理。

無(wú)水醋酸鈉 1.25g升汞 6.0g蒸餾水 90ml

使用前加入甲醛 10ml

(3)Bouin固定液：非凡適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻，收縮很少，不會(huì )使組織變硬變脆。需現配現用。

飽和苦味酸水溶液（約1.22%） 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml(4)Carnoy固定液：穿透能力強，可很好的固定細胞質(zhì)和細胞核，非凡適用于固定外膜致密的組織，也適用于糖原及尼氏小體的固定。

無(wú)水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml

(5) Zenker固定液：經(jīng)此液固定的標本，細胞核和細胞質(zhì)染色頗為清楚，但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽(yáng)光，以免引起化學(xué)變化而失效。

升汞 5.0g

重鉻酸鉀 2.5g

蒸餾水（加至） 100ml

6.組織施工的方式有哪些

答：考慮工程項目的施工特點(diǎn)、工藝流程、資源利用、平面或空間布置等要求，其施工可以采用依次、平行、流水等組織方式。

（1）依次施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）沒(méi)有充分地利用工作面進(jìn)行施工，工期長(cháng)； 2）如果按專(zhuān)業(yè)成立工作隊，則各專(zhuān)業(yè)隊不能連續作業(yè)，有時(shí)間間歇，勞動(dòng)力及施工機具等資源無(wú)法均衡使用； 3）如果由一個(gè)工作隊完成全部施工任務(wù)，則不能實(shí)現專(zhuān)業(yè)化施工，不利于提高勞動(dòng)生產(chǎn)率和工程質(zhì)量； 4）單位時(shí)間內投入的勞動(dòng)力、施工機具、材料等資源量較少，有利于資源供應的組織； 5）施工現場(chǎng)的組織、管理比較簡(jiǎn)單。 （2）平行施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）充分地利用工作面進(jìn)行施工，工期短； 2）如果每一個(gè)施工對象均按專(zhuān)業(yè)成立工作隊，則各專(zhuān)業(yè)隊不能連續作業(yè)，勞動(dòng)力及施工機具等資源無(wú)法均衡使用； 3）如果由一個(gè)工作隊完成一個(gè)施工對象的全部施工任務(wù)，則不能實(shí)現專(zhuān)業(yè)化施工，不利于提高勞動(dòng)生產(chǎn)率和工程質(zhì)量； 4）單位時(shí)間內投入的勞動(dòng)力、施工機具、材料等資源量成倍地增加，不利于資源供應的組織； 5）施工現場(chǎng)的組織、管理比較復雜。

（3）流水施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）盡可能地利用工作面進(jìn)行施工，工期比較短； 2）各工作隊實(shí)現了專(zhuān)業(yè)化施工，有利于提高技術(shù)水平和勞動(dòng)生產(chǎn)率，也有利于提高工程質(zhì)量； 3）專(zhuān)業(yè)工作隊能夠連續施工，同時(shí)使相鄰專(zhuān)業(yè)隊的開(kāi)工時(shí)間能夠最大限度地搭接； 4）單位時(shí)間內投入的勞動(dòng)力、施工機具、材料等資源量較為均衡，有利于資源供應的組織；。

7.組織部門(mén)劃分的常見(jiàn)方法有那些,并對每種方法進(jìn)行說(shuō)明

部門(mén)劃分，亦稱(chēng)為部門(mén)化，是對完成組織目標所必須開(kāi)展的各項活動(dòng)，按照一定的方式加以歸并組合，以形成便于管理的單位或部門(mén)。

部門(mén)劃分的基本方法有如下幾種： （1）按職能劃分部門(mén) 這是應用最廣泛的一種部門(mén)劃分方法，幾乎可以在所有類(lèi)型組織的結構中找到它的蹤跡。任何一個(gè)企事業(yè)組織存在的目的都是要創(chuàng )造某種為他人所需要的物品或勞務(wù)，所以，諸如制造（創(chuàng )造或增加物品或勞務(wù)的效用）、銷(xiāo)售（尋找愿意按一定價(jià)格購買(mǎi)物品或接受服務(wù)的顧客）、財務(wù)（資金的籌措、保管和運作）等，可以說(shuō)是所有的企事業(yè)組織的基本職能。

以這些基本職能為依據，便可以將組織劃分為生產(chǎn)部門(mén)、銷(xiāo)售部門(mén)、財務(wù)部門(mén)等。當然，由于各種組織的活動(dòng)領(lǐng)域以及同一職能在不同組織中的重要程度不同等原因，現實(shí)中這些職能部門(mén)在不同類(lèi)型的組織中會(huì )有不同的具體名稱(chēng)。

按照職能劃分部門(mén)的好處是：第一，有利于確保組織的主要基本活動(dòng)得到重視；第二，由于遵循了專(zhuān)業(yè)化原則，有利于提高人員使用的效率，同時(shí)也簡(jiǎn)化了培訓工作；第三，由于最高主管要對最終成果負責，從而為高層實(shí)施嚴格控制提供了手段。 這種劃分部門(mén)方式的缺點(diǎn)在于，它容易使人們過(guò)度局限于自己所在的職能部門(mén)而忽視組織整體目標，部門(mén)間的協(xié)調比較困難；只有最高主管才能對最終成果負責，因而對各部門(mén)的績(jì)效和責任很難進(jìn)行評價(jià)，也不利于培養綜合全面的管理人才。

（2）按產(chǎn)品劃分部門(mén) 這是許多開(kāi)展多角化經(jīng)營(yíng)的大企業(yè)經(jīng)常采用的部門(mén)劃分方式。它實(shí)際上是從按照職能劃分部門(mén)的企業(yè)中逐步發(fā)展起來(lái)的。

因為隨著(zhù)企業(yè)規模的擴大和產(chǎn)品品種的增加，管理工作變得越來(lái)越復雜，各部門(mén)主管者的工作負擔也越來(lái)越重，而管理幅度的客觀(guān)限制又使得他們難以通過(guò)增加直接下屬的辦法來(lái)解決問(wèn)題，因而，此時(shí)按照產(chǎn)品或產(chǎn)品系列來(lái)重新組織企業(yè)活動(dòng)就成為必要。在這樣的結構安排下，組織將有關(guān)某產(chǎn)品或產(chǎn)品系列的生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)等職能活動(dòng)方面授予該產(chǎn)品分部的經(jīng)理，使他們對該產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)的利潤負起責任。

按照產(chǎn)品劃分部門(mén)的好處是：有利于企業(yè)采用專(zhuān)門(mén)設備，促進(jìn)協(xié)調，充分發(fā)揮人員的技能和專(zhuān)門(mén)知識，也有利于產(chǎn)品和服務(wù)的改進(jìn)和發(fā)展；能夠明確利潤責任，便于最高主管把握各種產(chǎn)品或產(chǎn)品系列對總利潤的貢獻；有利于鍛煉和培養獨當一面的總經(jīng)理型的人才。 這種劃分部門(mén)方式的缺點(diǎn)主要是：它對產(chǎn)品分部主管人員的全面管理能力要求高；各產(chǎn)品分部的獨立性較強而整體觀(guān)念較弱；各產(chǎn)品分部?jì)榷夹枰３致毮懿块T(mén)或職能人員，從而造成資源重復配置、管理費用增加。

（3）按地域、區域劃分部門(mén) 這是經(jīng)營(yíng)活動(dòng)在地域上比較分散的企業(yè)所常用的一種部門(mén)劃分方法。其做法是，將某一地區的業(yè)務(wù)活動(dòng)集中起來(lái)，并委派相應的管理者，形成區域性的部門(mén)。

按照地域劃分部門(mén)，有利于鼓勵地方參與決策，促進(jìn)地區活動(dòng)的協(xié)調；有利于管理者注意當地市場(chǎng)的需要和問(wèn)題；生產(chǎn)的當地化有利于降低運輸費用，縮短交貨時(shí)間；有利于培養能力全面的管理者。 這種方法的主要缺點(diǎn)是，由于機構重復，使得費用增加，總部對地方控制的難度較大，要求管理者具有全面的管理能力。

（4）按顧客劃分部門(mén) 有許多組織按照自己所服務(wù)的顧客來(lái)劃分部門(mén)。這種方法是將與某一特定顧客有關(guān)的各種活動(dòng)結合起來(lái)，并委派相應的管理者以形成部門(mén)。

按照顧客劃分部門(mén)的目的是為了更好的迎合特定顧客群體的要求。采用這種方法有利于重視顧客的需要，增加顧客的滿(mǎn)意程度，并有利于形成針對特定顧客的技能和訣竅。

不足之處主要是，按照顧客組織起來(lái)的部門(mén)常常要求特殊對待而造成部門(mén)間協(xié)調困難，管理者必須要熟悉特定顧客的情況，否則在有些情況下很難輕而易舉地對顧客進(jìn)行區分。 （5）按照技術(shù)或設備劃分部門(mén) 制造業(yè)企業(yè)中設立的焊接車(chē)間、壓力加工車(chē)間、電鍍車(chē)間，醫院的放射科、CT室等，就是按照技術(shù)或設備組織業(yè)務(wù)活動(dòng)的。

這種方法有利于充分發(fā)揮設備的能力和專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員的特長(cháng)，便于設備維修和材料供應。不足之處是容易強調局部利益而忽視整體目標。

（6）按照時(shí)間劃分 根據時(shí)間來(lái)組織業(yè)務(wù)活動(dòng)是最古老的劃分部門(mén)的方法之一，多見(jiàn)于組織的底層。在許多組織中，由于經(jīng)濟的、技術(shù)的或其他一些原因，正常的工作日不能滿(mǎn)足要求，而必須采用輪班的做法。

例如，煉鋼爐、醫院的集中監護室、消防隊等，均采用這種方法來(lái)進(jìn)行組織。采用這種方法有利于連續、不間斷地提供服務(wù)和進(jìn)行生產(chǎn)，有利于使設備、設施得到最充分的利用。

缺點(diǎn)在于夜間可能會(huì )缺乏監督，人員容易疲勞，協(xié)調和溝通有時(shí)會(huì )比較困難。 （7）按照人數劃分 單純地按照人數來(lái)安排業(yè)務(wù)活動(dòng)是一種最原始、最簡(jiǎn)單的劃分部門(mén)的方法。

當最終成果只是取決于總人數時(shí)，或者說(shuō)每個(gè)人的貢獻都是單純無(wú)差別的簡(jiǎn)單勞動(dòng)時(shí)，采用這種方法是有效的。

8.組織措施包括哪些

保證安全的組織措施和技術(shù)措施一、保證安全的組織措施一般包括：工作票制度、工作許可制度、工作監護制度、工作間斷、轉移和終結以及恢復送電制度。

1、工作票制度工作票是準許在電氣設備，熱力和機械設備以及電力線(xiàn)路上工作的書(shū)面命令書(shū)。（1）發(fā)電廠(chǎng)（變電站）第一種工作票；在發(fā)電廠(chǎng)或變電所高壓電氣設備上工作，需要全部或部分停電；在高壓室內的二次接線(xiàn)和照明等回線(xiàn)上的工作，需要將高壓設備停電或做安全措施的工作。

（2）發(fā)電廠(chǎng)（變電站）第二種工作票；在發(fā)電廠(chǎng)或變電所的電氣設備上帶電作業(yè)和在帶電設備外殼上的工作，在控制盤(pán)和低壓配電盤(pán)、配電箱、電源干線(xiàn)上的工作；二次接線(xiàn)回路上工作而無(wú)需將高壓設備停電；轉動(dòng)中的發(fā)電機，同期調相機的勵磁回路或高壓電動(dòng)機轉子電阻回路上的工作；非當班值班人員用絕緣棒和電壓互感器定相或用鉗型電流表測量高壓回路的電流。（3）電力線(xiàn)路第一種工作票；在停電線(xiàn)路（或在雙回線(xiàn)路中的一回停電線(xiàn)路）上的工作；在全部或部分停電的配電變壓器高架上或配電變壓器室內的工作。

（4）電力線(xiàn)路第二種工作票；在電力線(xiàn)路上帶電作業(yè)；在帶電線(xiàn)路桿塔上工作；在運行中的配電變壓器臺上或配電變壓器室內的工作。（5）熱力機械工作票；（6）一級動(dòng)火票；（7）二級動(dòng)火票。

工作票所涉及人員：（1）工作票簽發(fā)人；（2）工作負責人（監護人）；（3）工作許可人；（4）工作班成員。2、工作許可制度工作許可制度，是在完成安全措施之后，為進(jìn)一步加強。