細菌純培養(yǎng)方法(細菌培養(yǎng)的方法)
1.細菌培養(yǎng)的方法有哪些
根據(jù)培養(yǎng)細菌的目的和培養(yǎng)物的特性培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種。
1、一般培養(yǎng)法：將已接種過的培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)18-24小時，需氧菌和兼性厭氧菌即可于培養(yǎng)基上生長。少數(shù)生長緩慢的細菌，需培養(yǎng)3-7天直至一個月才能生長。
為使培養(yǎng)箱內(nèi)保持一定濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。培養(yǎng)時間較長的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口塞棉塞后用石臘凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。
2、二氧化碳培養(yǎng)法：某些細菌，如牛流產(chǎn)布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空氣中才能生長，尤其是初代分離培養(yǎng)要求更為嚴格。將已接種的培養(yǎng)基置于二氧化碳環(huán)境中進行培養(yǎng)的方法即二氧化碳培養(yǎng)法，
3、厭氧培養(yǎng)法：常用的厭氧培養(yǎng)方法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱三種。
擴展資料：
培養(yǎng)時應(yīng)根據(jù)細菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。
一般操作步驟為先將標本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進一步對所得單個菌落進行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。
一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18~24小時生長。厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2~3天后生長。個別細菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個月之久。
通過日常管理、檢測、檢查，了解光合細菌的生長情況，就可以結(jié)合當(dāng)時環(huán)境條件的變化進行分析，找出影響光合細菌生長繁殖的原因，采取相應(yīng)的措施。影響光合細菌生長的原因很多，內(nèi)因是菌種是否優(yōu)良，外因是光照、溫度、營養(yǎng)、敵害和厭氣程度等。
溫度、光照和pH值都能影響著光合細菌的生長，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強弱是對立統(tǒng)一的，所以光合細菌生長的最適條件應(yīng)是互應(yīng)的，即溫度高，光照應(yīng)弱；溫度低，光照應(yīng)強。
如果是溫度高，光照強，pH值就會迅速升高，培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀，抑制光臺細菌的生長；如果溫度低，光照弱，光合細菌得不到最佳能源，生長速度也慢。經(jīng)試驗得出光合細菌生長的最適條件是：
①溫度15~20℃時，光照30000~50000lx，培養(yǎng)基pH值為7.0;
②溫度25~30℃時，光照為3000~5000lx，培養(yǎng)基的pH值為7.0。
參考資料來源：搜狗百科——細菌培養(yǎng)
2.獲得微生物純培養(yǎng)的方法及特點
一、固體培養(yǎng)基分離
1、稀釋倒平板
特點：菌落分離較為均勻，進行微生物計數(shù)結(jié)果相對準確。但操作相對麻煩，熱敏感菌有時易被燙死，而嚴格好氧菌也可能因被固定在培養(yǎng)基中生長受到影響。
2、涂布平板法
特點：操作相對簡單，是較常使用的常規(guī)方法。但有時會因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開，進行微生物計數(shù)時需對稀釋和涂布過程的操作特別注意，否則不易得到準確的結(jié)果。
3、平板劃線法
特點：操作簡單，多用于對已有純培養(yǎng)的確認和再次分離。
應(yīng)用：這三種方法可用于所有能在固體培養(yǎng)基表面形成菌落的微生物的純培養(yǎng)分離。并且，通過選用適當(dāng)?shù)倪x擇平板及培養(yǎng)條件，可直接分離各種具有特定生理特征的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術(shù)結(jié)合，這3種方法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養(yǎng)。
4、稀釋搖管法
特點：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于菌落形成在瓊脂柱的中間，觀察和挑取都相對困難。
應(yīng)用：在缺乏專業(yè)的厭氧操作設(shè)備的情況下對嚴格厭氧菌進行分離和觀察。
二、液體培養(yǎng)基分離
1、稀釋法
特點：工作量大，是否獲得純培養(yǎng)需依靠統(tǒng)計學(xué)的推測。
應(yīng)用：不能或不易在固體培養(yǎng)基上生長的微生物進行純培養(yǎng)分離或數(shù)量統(tǒng)計。
2、富集培養(yǎng)
特點：一般不能直接獲得微生物的純培養(yǎng)，在通過富集培養(yǎng)使原本在自然環(huán)境中占少數(shù)的微生物的數(shù)量大大提高后，需再通過平板法進行相應(yīng)微生物純培養(yǎng)的分離和檢測。
應(yīng)用：
(1)根據(jù)某種微生物的特殊生長要求，按照意愿從自然界中對這種微生物進行有針對性的有效分離；
(2)分離培養(yǎng)出由科學(xué)家設(shè)計的特定環(huán)境中能生長的微生物，盡管我們并不知道什么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長。
三、顯微操作
單細胞（孢子）挑取
特點：分離過程直觀，可靠，但對儀器和操作技術(shù)要求較高，多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究。而挑取的微生物單細胞或孢子需經(jīng)固體或液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后才能獲得其純培養(yǎng)物。
應(yīng)用：從樣品中直接分離所需的微生物細胞或孢子，獲得其純培養(yǎng)。
3.微生物分離和純培養(yǎng)技術(shù)有哪些
微生物的培養(yǎng)方式
1.分批培養(yǎng)（batchculture）將微生物置于一定容積的培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，最后一次收獲，謂分批培養(yǎng)。在分批培養(yǎng)中，培養(yǎng)基一次加入，不予補充，不再更換。由于營養(yǎng)消耗，代謝產(chǎn)物積累，對數(shù)生長期不能長期維持。
2.連續(xù)培養(yǎng)（continuous culture）在培養(yǎng)器中不斷補充新鮮營養(yǎng)物質(zhì)，并不斷排出部分培養(yǎng)物（包括菌體和代謝產(chǎn)物），以保持長時間生長狀態(tài)的一種培養(yǎng)方式。主要有恒濁連續(xù)培養(yǎng)和恒化連續(xù)培養(yǎng)兩類。恒濁連續(xù)培養(yǎng)通過不斷調(diào)節(jié)流速，使培養(yǎng)液濁度保持恒定，因而可不斷提供具有一定生理狀態(tài)的細胞，并可得到以最高生長速率進行生長的培養(yǎng)物。恒化連續(xù)培養(yǎng)通過控制恒定的流速使營養(yǎng)物濃度基本恒定，從而使微生物保持恒定的生長速率。用不同濃度的限制性營養(yǎng)物進行恒化培養(yǎng)，可得到不同生長速率的培養(yǎng)物。
3.半連續(xù)培養(yǎng)（semi-continuous culture）在發(fā)酵罐中的一部分發(fā)酵液保留下來作為菌種液，放出其余部分進入提練加工工序，在剩余的培養(yǎng)液中加滿新的未接種的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，如此反復(fù)，謂之半連續(xù)培養(yǎng)。
4.補料分批培養(yǎng)（fed-batch culture）補料分批培養(yǎng)又稱半分批培養(yǎng)，是指在分批培養(yǎng)過程中，間歇或連續(xù)地補加新鮮培養(yǎng)液，但不取出培養(yǎng)物。待培養(yǎng)到適當(dāng)時期，將其從反應(yīng)器中放出，從中提取目的生成物（菌體或代謝產(chǎn)物）。若放出大部分培養(yǎng)物后，繼續(xù)進行補料培養(yǎng)，如此反復(fù)進行，則稱為重復(fù)補料分批培養(yǎng)（repeated fed-batch culture）。與傳統(tǒng)分批發(fā)酵相比，補料分批發(fā)酵的優(yōu)點在于使發(fā)酵系統(tǒng)中的基質(zhì)濃度維持在低水平，這有以下優(yōu)點：①可除去快速利用碳源的阻遏效應(yīng)，并維持適當(dāng)?shù)木w濃度，以減輕供氧矛盾；②避免有毒代謝物的抑菌作用；③大為減少了無菌操作要求十分嚴格的接種的次數(shù)。與連續(xù)發(fā)酵相比，補料分批培養(yǎng)不會產(chǎn)生菌種老化和變異等問題。故其應(yīng)用范圍十分廣泛。
5.同步培養(yǎng) 能使培養(yǎng)的微生物處于較一致的，生長發(fā)育在同一階段上的培養(yǎng)方法叫同步培養(yǎng)法。利用同步培養(yǎng)法控制細胞的生長，使它們處于同一生長階段，所有細胞都能同時分裂，這種生長方式叫同步生長（圖3—4）。用同步培養(yǎng)法得到的培養(yǎng)物叫同步培養(yǎng)物（synchronous culture）。這樣，群體和個體行為一致，即可用研究群體的方法來研究個體水平上的問題。由于同步群體的個體差異，同步生長往往最多維持2個~3個世代，然后又逐步變?yōu)殡S機生長。
青島海博生物技術(shù)有限公司，主要從事生物、醫(yī)學(xué)及相關(guān)領(lǐng)域的產(chǎn)品技術(shù)研究、開發(fā)和銷售，涉及分子生物學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)用診斷試劑以及各種微生物、檢驗用培養(yǎng)基等諸多方面。
海博生物技術(shù)有限公司現(xiàn)有產(chǎn)品：干燥培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基、常規(guī)檢驗培養(yǎng)基、藥典培養(yǎng)基、植物組織培養(yǎng)基、運送培養(yǎng)基、臨床檢驗培養(yǎng)基、動物疫苗培養(yǎng)基、一次性平板等。
干燥培養(yǎng)基：有600多個品種，采用法國進口原料制作， 質(zhì)量穩(wěn)定、特異性好，并在不斷開發(fā)新產(chǎn)品。
支原體培養(yǎng)基：由于質(zhì)量穩(wěn)定、特異性好，廣泛用于全國各大醫(yī)院和皮膚病?？漆t(yī)院，得到用戶的一致好評。
顯色培養(yǎng)基：生產(chǎn)金黃葡萄球菌顯色培養(yǎng)基、大腸桿菌顯色培養(yǎng)基、大腸菌群顯色培養(yǎng)基、大腸桿菌和大腸菌群二合一顯色、李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基、0157菌顯色培養(yǎng)基、弧菌顯色培養(yǎng)基、坂崎桿菌顯色培養(yǎng)基等。
生化試劑：經(jīng)營多種生化試劑，品種齊全，質(zhì)量保證。
4.微生物的培養(yǎng)方法有哪些
1905年，德國微生物學(xué)家科赫因?qū)Y(jié)核桿菌和結(jié)核菌素的研究取得重大成就而榮獲諾貝爾獎金。
他發(fā)明固體培養(yǎng)基，用它分離培養(yǎng)細菌，創(chuàng)造細菌的純粹培養(yǎng)法。他又改進細菌染色法，為研究細菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)創(chuàng)造有利條件。
荷蘭科學(xué)家E.C.翰遜教授研究使啤酒發(fā)酵的酵母，創(chuàng)造單細胞的純粹培養(yǎng)法。以后，又有人采用純粹培養(yǎng)法選擇適當(dāng)酵母，用于啤酒的工業(yè)生產(chǎn)，為純粹培養(yǎng)法在工業(yè)發(fā)酵上的應(yīng)用開辟了道路。
翰遜的學(xué)生哈斯發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時用的由明膠制成的固體培養(yǎng)基很容易發(fā)生液化現(xiàn)象，使用時有困難。哈斯的妻子建議用瓊脂代替明膠，獲得了較好的效果。
這種瓊脂培養(yǎng)基被后人采用，一直沿用到今天。后來又有人創(chuàng)造一種培養(yǎng)皿，可供微生物平板分離用。
從此以后，分離出的微生物日益增多，新的微生物不斷被發(fā)現(xiàn)。這樣，可供工業(yè)用的微生物也日益充實起來，一支微生物生力軍異軍突起。
5.“細菌培養(yǎng)”的具體培養(yǎng)步驟是什么
以光合細菌培養(yǎng)方法為例。光合細菌培養(yǎng)的方法，按次序分為容器、工具的消毒， 培養(yǎng)基的制備，接種和培養(yǎng)管理四個步驟。
（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。
（二）培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)用水
如果培養(yǎng)的光合細菌是淡水種，菌種培養(yǎng)可用蒸餾水，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來水（或井水）配制。如果培養(yǎng)的光合細菌是海水種，則用天然海水配制培養(yǎng)基，注意在海水中加入磷元素時，不能用 磷酸氫二鉀，應(yīng)用 磷酸二氫鉀，不然會產(chǎn)生大量沉淀。
2.滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉（或漂白液）消毒后使用。
3. 培養(yǎng)基配制根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時按比例加入一定的量即可。
（三）接種培養(yǎng)基配好后，應(yīng)立即進行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高，一般為20%~50%，即菌種 母液量和新配 培養(yǎng)液雖之比為1∶4~1∶1，不應(yīng)低于20%，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應(yīng)高些，否則光合細菌在培養(yǎng)液中很難占絕對優(yōu)勢，影響培養(yǎng)的最終產(chǎn)量和質(zhì)量。
（四）培養(yǎng)管理光合細菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個方面。
根據(jù)臨床初步診斷及待檢細菌的種類，可選用不同環(huán)境條件進行培養(yǎng)。常用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。為了提高檢驗的正確率，同一標本常同時采用兩種或三種不同的培養(yǎng)法。
（一）需氧培養(yǎng)法
本法是臨床細菌室最常用的培養(yǎng)方法，適于一般需氧和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。將已接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等，置于35℃溫箱中孵育18~24h，一般細菌可于培養(yǎng)基上生長，但有些難以生長的細菌需培養(yǎng)更長的時間才能生長。另外，有的細菌最適生長溫度是28℃~30℃，如鼠疫耶爾森菌，甚至在4℃也能生長，如李斯特菌。
（二）二氧化碳培養(yǎng)法
有些細菌初次分離培養(yǎng)時須置5%~l0%C02環(huán)境才能生長良好，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，牛布魯菌等。常以下列方法供給C02。
1.二氧化碳培養(yǎng)箱：是一臺特制的培養(yǎng)箱，既能調(diào)節(jié)C02的含量，又能調(diào)節(jié)所需的溫度。C02從鋼瓶通過培養(yǎng)箱的C02，運送管進入培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)好所需C02，濃度自動控制器后，將接種好的培養(yǎng)基直接放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。此法適于大型實驗室應(yīng)用。
2.燭缸法：將已接種好的培養(yǎng)基置干燥器內(nèi)，并放入點燃的蠟燭。干燥器蓋的邊緣涂上凡士林，蓋上蓋子，燭光經(jīng)幾分鐘后自行熄滅，此時干燥器內(nèi)C02含量約占5%~l0%，然后將干燥器放入35℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)時間一般為18~24h，少數(shù)菌種需培養(yǎng)3~7天或更長。
3.化學(xué)法：按每升容積加入碳酸氫鈉0.49和濃鹽酸0.35ml的比例，分別置于容器內(nèi)。將容器連同接種好的培養(yǎng)基都放人干燥器內(nèi)，蓋緊干燥器的蓋子，傾斜容器使?jié)恹}酸與碳酸氫鈉接觸生成C02。
（三）厭氧培養(yǎng)法
適用于專性厭氧菌和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。常用的厭氧培養(yǎng)法有：①皰肉培養(yǎng)基法；②焦性沒食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法。
6.細菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和常用方法有哪些
一、基本要領(lǐng)
菌種分離主要在培養(yǎng)皿上進行，常用的方法是稀釋法和劃線法。
菌種分離的目的是是微生物的一個個體通過繁殖，在固體培養(yǎng)基上長出肉眼能見的群體，然后根據(jù)培養(yǎng)特征，用接種針調(diào)取所需菌種并在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。
改變培養(yǎng)基條件也有助于菌種分離。沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足一切微生物生長的需要，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。
如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設(shè)計特定環(huán)境使之適合這種微生物的生長，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。
二、方法
1、稀釋倒平板法
首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分別取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間即可出現(xiàn)菌落。
如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。
2、涂布平板法
因為將微生物懸液先加到較燙的培養(yǎng)基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且采用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學(xué)研究中常用的純種分離方法是涂布平板法。
其做法是先將已熔化的培養(yǎng)基倒入無菌平皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個菌落。
3、平板劃線法
最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行連續(xù)劃線，微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。
有時這種單菌落并非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離目的的。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。
4、稀釋搖管法
用固體培養(yǎng)基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露于空氣中不立即死亡，可以采用通常的方法制備平板，然后置放在封閉的容器中培養(yǎng)，容器中的氧氣可采用化學(xué)、物理或生物的方法清除。
對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養(yǎng)的分離則可采用稀釋搖管培養(yǎng)法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。
先將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝后，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養(yǎng)基和空氣隔開。
培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一只滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一只毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養(yǎng)皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。
擴展資料
在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用于實驗室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養(yǎng)基分離純化常用的方法。
一般情況下可以通過適當(dāng)改善培養(yǎng)基的條件來培養(yǎng)特點菌種。
如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進行培養(yǎng)。有時投加相應(yīng)的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數(shù)滴，可以抑制霉菌和細菌的生長，而有利于放線菌的分離。在培養(yǎng)基中投加一定量的青霉素或鏈霉素能抑制細菌的生長，而有利于霉菌的分離。
參考資料來源：搜狗百科-菌種分離
7.微生物獲得純培養(yǎng)的方法理論依據(jù)是什么
微生物純培養(yǎng)的方法
一、固體培養(yǎng)基分離
1、稀釋倒平板
特點：菌落分離較為均勻，進行微生物計數(shù)結(jié)果相對準確。但操作相對麻煩，熱敏感菌有時易被燙死，而嚴格好氧菌也可能因被固定在培養(yǎng)基中生長受到影響。
2、涂布平板法
特點：操作相對簡單，是較常使用的常規(guī)方法。但有時會因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開，進行微生物計數(shù)時需對稀釋和涂布過程的操作特別注意，否則不易得到準確的結(jié)果。
3、平板劃線法
特點：操作簡單，多用于對已有純培養(yǎng)的確認和再次分離。
應(yīng)用：這三種方法可用于所有能在固體培養(yǎng)基表面形成菌落的微生物的純培養(yǎng)分離。并且，通過選用適當(dāng)?shù)倪x擇平板及培養(yǎng)條件，可直接分離各種具有特定生理特征的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術(shù)結(jié)合，這3種方法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養(yǎng)。
4、稀釋搖管法
特點：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于菌落形成在瓊脂柱的中間，觀察和挑取都相對困難。
應(yīng)用：在缺乏專業(yè)的厭氧操作設(shè)備的情況下對嚴格厭氧菌進行分離和觀察。
二、液體培養(yǎng)基分離
1、稀釋法
特點：工作量大，是否獲得純培養(yǎng)需依靠統(tǒng)計學(xué)的推測。
應(yīng)用：不能或不易在固體培養(yǎng)基上生長的微生物進行純培養(yǎng)分離或數(shù)量統(tǒng)計。
2、富集培養(yǎng)
特點：一般不能直接獲得微生物的純培養(yǎng)，在通過富集培養(yǎng)使原本在自然環(huán)境中占少數(shù)的微生物的數(shù)量大大提高后，需再通過平板法進行相應(yīng)微生物純培養(yǎng)的分離和檢測。 應(yīng)用：
(1)根據(jù)某種微生物的特殊生長要求，按照意愿從自然界中對這種微生物進行有針對性的有效分離；
(2)分離培養(yǎng)出由科學(xué)家設(shè)計的特定環(huán)境中能生長的微生物，盡管我們并不知道什么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長。
三、顯微操作
單細胞（孢子）挑取
特點：分離過程直觀，可靠，但對儀器和操作技術(shù)要求較高，多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究。而挑取的微生物單細胞或孢子需經(jīng)固體或液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后才能獲得其純培養(yǎng)物。 應(yīng)用：從樣品中直接分離所需的微生物細胞或孢子，獲得其純培養(yǎng)。
