將已經(jīng)液化的精液標(biāo)本均勻混合,用白細(xì)胞計(jì)數(shù)吸管吸精液至0.5刻度,再吸稀釋液至11刻度,振蕩三分鐘,然后置于血球計(jì)數(shù)板內(nèi),計(jì)數(shù)二大格(每格面積1平方毫米)之精子數(shù),在尾數(shù)后加5個(gè)“0”即得每毫升精液內(nèi)精子數(shù)。
例如計(jì)數(shù)為1280個(gè),則每毫升精子應(yīng)為128,000,000。精液稀釋液之配制:重碳酸鈉5克、福爾馬林1毫升、蒸餾水加至100毫升。
稀釋液內(nèi)重碳酸鈉有消化粘液的作用,福爾馬林有使精子制動(dòng)的作用。如精液之稠度過(guò)高而不易吸取時(shí),可以精液1毫升混勻于稀釋液19毫升內(nèi),稀釋后進(jìn)行計(jì)數(shù)。
如精子的數(shù)目極少,亦可改為稀釋10倍計(jì)數(shù)。每次排精75%的精子是從附睪尾部所貯存的,還有25%是由輸精管道的其他部分來(lái)的,因此單憑一次排精的精子計(jì)數(shù)來(lái)衡量睪丸生精機(jī)能是不全面的。
只有在排精后間隔4-5天以后多次精液檢查,才能比較正確地從這些精子計(jì)數(shù)來(lái)反映睪丸的生精機(jī)能。
為了比較精確地評(píng)定精子密度,可采用精子計(jì)數(shù)的方法,即應(yīng)用計(jì)數(shù)血細(xì)胞的方法計(jì)算精子數(shù),將1滴精液置于玻片上,用紅細(xì)胞吸管吸精液至“0.5”刻度處,然后吸人3%氣花鈉液至“1.0”刻度處,3%氣化鈉用于殺死精子和進(jìn)行稀釋?zhuān)阌谟^(guān)察計(jì)數(shù)。
用拇指和食指分別按住吸管的兩端,輕輕搖蕩,使精液和氣化鈉充分混勻,然后棄去吸管前端數(shù)滴,將吸管尖端放在計(jì)箅板與蓋玻片之間的空隙邊緣,使吸管內(nèi)精液流入計(jì)算室,注意防止精液流到蓋玻片上面。計(jì)算室用刻線(xiàn)劃分成25個(gè)正方形大方格,每個(gè)大方格又劃分為16個(gè)小方格,共400個(gè)小方格,面積為1毫米2。
將計(jì)算板放在顯微鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)大方格(80個(gè)小方格)的精子數(shù),所選擇的5個(gè)大方格,應(yīng)位于一條對(duì)角線(xiàn)上,或四角各取1個(gè)角再加中央1個(gè)。
有以下兩種方式: (1)精子的取樣與計(jì)數(shù)將備用的精液攪勻,吸出幾十毫升 置于杯中,加人1?2滴碘酒,將精子固定后搖勻,取1滴置于 100倍的顯微鏡下計(jì)數(shù)(應(yīng)在鏡下計(jì)數(shù)2?3滴,取平均數(shù)),換 算出每毫升精液的精子濃度(每滴精子數(shù)X每毫升水的滴數(shù)=每 毫升含有精子數(shù))。
也可以將上述水樣置于血球計(jì)數(shù)板中用顯微 鏡計(jì)數(shù)。 (2)卵的取樣與計(jì)數(shù)卵粒較精子大得多,計(jì)數(shù)比較容易。
將卵液攪勻,用移液管吸取2?10毫升(視卵的密度)放人玻璃 杯中,加少量清水,把杯子放在深色的基面上,用肉眼即可清晰 地將卵全部計(jì)數(shù)?;?qū)⒑训乃w充分輕輕攪勻,將2毫升移液 管(管口要粗些)伸入水中,取出水樣直接用肉眼計(jì)算管中的卵 量。
上述兩種方法取樣計(jì)數(shù)至少3次以上,求平均值,換算出水 中每毫升的含卵量與全水體總卵量。
檢測(cè)精子的質(zhì)量最好是去醫(yī)院,醫(yī)院會(huì)有專(zhuān)門(mén)的儀器幫助檢驗(yàn)精子的質(zhì)量的。注意去醫(yī)院檢測(cè)之間最好不要有太大的心里情感起伏,最好是心情比較平靜的時(shí)候,這樣更加有利于檢測(cè)精子的質(zhì)量。
檢測(cè)精子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)有哪些
1、精液量。一個(gè)正常的成年男性每次射精的量為≥2ml,大于7ml時(shí)為過(guò)多不僅精子的密度降低,而且易從陰道中流出以致精子總數(shù)降低;小于2ml則為精液量過(guò)少,精液與女性生殖道接觸面積小,或因粘稠不利于精子進(jìn)入女方宮頸口。精液量過(guò)多、過(guò)少屬于精液精子異常之一,精液異常嚴(yán)重的影響了精子的數(shù)量和質(zhì)量,都可能最終導(dǎo)致男性不育。
2、存活率。射精之后1小時(shí)內(nèi)檢查,活精子≥50%為正常情況。副性腺炎癥、精索靜脈曲張、精液中存在抗精子抗體等原因都會(huì)影響男性精子存活率。
3、顏色。正常精液是灰白色或略帶黃色,乳白色或黃綠色有可能是生殖道或副性腺存在炎癥。粉色、紅色可能是血性精液,常見(jiàn)于副性腺、后尿道的炎癥。偶可見(jiàn)于結(jié)核或腫瘤。
4、粘稠度。檢查時(shí)候?qū)⒉AО艚佑|已經(jīng)液化的精液,輕輕提起的時(shí)候可形成小于2cm的精液絲為正常情況。
5、精子計(jì)數(shù)。一般情況下每毫升精液中的精子數(shù)≥20*106ml,如果過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響精子活動(dòng)力和正常功能。
6、酸堿度。正常精子的PH值在7.2—7.8之間,這樣就有利于綜合女性陰道的酸性環(huán)境,這樣精子活動(dòng)力就強(qiáng),容易使女方受懷孕如果是偏酸性的,就提示有炎癥,那樣受孕的機(jī)會(huì)就少。
7、染色體分析。對(duì)于檢測(cè)精子質(zhì)量可以通過(guò)男性的染色體進(jìn)行分析,如果染色體方面存在了問(wèn)題,就會(huì)引起精子數(shù)目過(guò)少、精子大量畸形、活動(dòng)能力過(guò)低或根本就沒(méi)有精子的結(jié)果。
影響精子成活率低的因素主要有: 1、生殖系統(tǒng)感染(前列腺炎,精囊炎,附睪炎,尿道炎)使精液成分改變,鎂、鋅、檸檬酸、果糖減少和pH升高都會(huì)影響精子活力造成影響。
2、長(zhǎng)期禁欲導(dǎo)致精子活力度差,死精子多,這種情況屬正常,所以檢查精液前以禁欲5~7d為宜。 3、精索靜脈曲張?jiān)斐申幠覝囟壬?,也可以使精子活?dòng)力低下。
4、睪丸損傷或病變導(dǎo)致精子營(yíng)養(yǎng)分泌不足,引起的精子成活率低。 精子成活率檢查 精液常規(guī)查哪些方面 以往,不少人認(rèn)為只要一檢查精液常規(guī)就可以了解男性的生育能力是否正常,其實(shí)這是非常片面的。
目前常規(guī)精液分析主要可以了解精液量、精子密度及其精液中精子的總數(shù)量、精子凝集、精子活力與活率、精子形態(tài)、精液液化等方面的信息。 實(shí)際上這些內(nèi)容的分析,只是非常表淺的分析,有時(shí)還難以真正了解精子的功能和受精潛能,特別是在人工授精及試管嬰兒方面,尚不能僅僅通過(guò)精液常規(guī)所提供的信息,決定是否可以進(jìn)行人工授精。
宮頸粘液穿透試驗(yàn) 精子活力是否正常,是自然受孕和提高人工授精成功率的關(guān)鍵。精子要穿透宮頸粘液,通過(guò)女性生殖道達(dá)到授精部位,穿透卵丘與透明帶,必須具有一定的活力,缺乏活力的精子數(shù)量再多也是沒(méi)有用處的。
宮頸粘液穿透試驗(yàn),也是在不育癥患者中經(jīng)常需要做的一項(xiàng)檢查。一般情況下,影響精子穿透宮頸粘液的常見(jiàn)因素為宮頸粘液的理化狀態(tài)、精漿酶的活性、精子的運(yùn)動(dòng)質(zhì)量等。
了解精子與宮頸粘液的相互作用,臨床目前多采用性交后試驗(yàn)的方法。在人工授精的時(shí)候,一定要盡量選擇穿透宮頸粘液能力強(qiáng)的精子,這樣對(duì)提高受孕率具有積極作用。
精子功能的生化指標(biāo) 了解精子功能的生化指標(biāo),對(duì)準(zhǔn)確評(píng)價(jià)男性生育能力十分有益。在精漿中,存在著包括酶、小分子有機(jī)物、無(wú)機(jī)物在內(nèi)的各種生化成分。
這些成分的存在對(duì)保護(hù)、促進(jìn)與維護(hù)精子的正常功能具有非常重要的意義。 在這些成分中,乙酰肉毒堿顯得非常重要,因?yàn)樗蔷舆\(yùn)動(dòng)的一種能源儲(chǔ)備形式,對(duì)精子活力的產(chǎn)生和加強(qiáng)具有重要的作用。
獲能及其頂體反應(yīng)的檢測(cè),對(duì)部分不育癥來(lái)說(shuō)是應(yīng)查項(xiàng)目。在受精過(guò)程中,頂體蛋白酶及透明質(zhì)酸酶的作用最為重要。
當(dāng)精子與卵泡結(jié)合的初期,精子就會(huì)遇到圍繞在卵母細(xì)胞周?chē)穆亚鸺?xì)胞的阻攔,精子必須穿過(guò)卵丘的基層,然后向透明帶“進(jìn)軍”。 頂體反應(yīng) 精子獲能后,這些酶被釋放出來(lái),以分解卵細(xì)胞周?chē)姆派涔诤屯该鲙?,為精子進(jìn)入卵子打開(kāi)方便之門(mén)。
倘若缺乏這些酶的作用,精卵結(jié)合將成為可望不可及的分離結(jié)局,受孕也就成為一句空話(huà)。在人類(lèi)生育過(guò)程中,頂體反應(yīng)同樣也是相當(dāng)重要的。
該反應(yīng)是一種使精子頂體區(qū)前2/3處以及精子漿膜和外頂體膜有順序的空泡化過(guò)程,也是為精子進(jìn)入卵泡促成精卵結(jié)合的最后過(guò)程。這一過(guò)程出現(xiàn)“故障”,男性就有可能難以實(shí)現(xiàn)正常生育。
因而,目前在臨床上經(jīng)常要檢查精子的頂體反應(yīng)是否正常。 其他方面 之外,檢查精液中非精子細(xì)胞包括未成熟的精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、生殖脫落的上皮細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等,對(duì)精液中的非精子細(xì)胞的全面正確評(píng)價(jià)、精子計(jì)數(shù)及其活力,均有非常重要的作用。
例如,醫(yī)學(xué)研究業(yè)已表明精液中的白細(xì)胞及其產(chǎn)物,可降低精子的活動(dòng)率和活動(dòng)力,前者還會(huì)刺激生殖道產(chǎn)生局部抗精子抗體,影響或阻礙精子的運(yùn)動(dòng)和成熟,影響精子穿透卵子的能力。只有得到了正確的精子檢查結(jié)果,才能進(jìn)行有效的治療。
對(duì)于精子成活率低該怎么辦呢? 首先通過(guò)精子分析儀檢查出精子成活率是多少,再了解患者有沒(méi)有男科其他病史或疾病,確定是否有其他疾病而引起精子成活率低。最后制訂詳細(xì)的治療方案,例如患者有生殖感染疾病,必須先治療生殖感染疾病,同時(shí)戒影響精子成活率的不良習(xí)慣,如吸煙、飲酒等。
再進(jìn)行中西醫(yī)聯(lián)合施治,并配合使用物理療法,達(dá)到理想的治療效果。當(dāng)然患者也必須按醫(yī)囑配合治療,并加強(qiáng)自身鍛煉提高身體素質(zhì),注意飲食搭配,按醫(yī)囑食用一些有助精子生長(zhǎng)的食物等等,以便全方位提高精子成活率,達(dá)到理想的治療效果。
以上介紹了有關(guān)精子成活率低的問(wèn)題,只要患者積極采取治療措施,一般都可以恢復(fù)正常的精子活率,但必須到正規(guī)專(zhuān)業(yè)的醫(yī)院進(jìn)行治療,切記不要依賴(lài)一些偏方,要以科學(xué)的態(tài)度對(duì)待才是正確解決辦法。
MAKLER 精子計(jì)數(shù)板使用說(shuō)明書(shū) 一、描述: Makler 精子計(jì)數(shù)板(腔室)是一種方便精子計(jì)數(shù)的設(shè)備,用于快速精確的精子計(jì)數(shù)、活動(dòng)性和形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià),可使用未稀釋的樣品。
計(jì)數(shù)板包括兩個(gè)部分: 1. 下面的主要部分有一個(gè)金屬基底(A)和兩個(gè)把手(H)。在基底的中心有一個(gè)光學(xué)平玻璃制的平盤(pán)(D),樣品放置其上。
在平盤(pán)周?chē)兴膫€(gè)針(P)。他們的尖端比平盤(pán)高10微米。
2. 上面部分是覆蓋玻璃(C)被一個(gè)金屬環(huán)環(huán)繞。在他的下表面中心有一個(gè) 1 mm平方的格子,被分成100個(gè)方格,每個(gè)是0.1 mm * 0.1mm 。
當(dāng)覆蓋玻璃放置在四個(gè)針上時(shí),在一行上的10個(gè)方格包圍的空間就是一毫升的百萬(wàn)分之一。因此,在10個(gè)方格里的精子頭數(shù)量代表著他們以 百萬(wàn)/mL 為單位的濃度。
二、腔室的準(zhǔn)備: 在把樣品放在平盤(pán)上之前,確保相對(duì)表面徹底清潔且無(wú)塵,因?yàn)榇蠖鄶?shù)顆粒的尺寸大于玻璃間的狹小空間。為了此目的,用鏡頭紙擦兩個(gè)表面。
清潔度可以通過(guò)把覆蓋玻璃放置到四個(gè)針上,觀(guān)察四個(gè)接觸點(diǎn)彩色邊紋(Newton現(xiàn)象)來(lái)檢查。對(duì)著熒光燈可以看到最好的效果。
三、精液分析的方法: 充分混合樣品,注意避免產(chǎn)生氣泡。通過(guò)木棒或移液器的幫助,在平盤(pán)中心區(qū)域放置一小滴。
用手指拿起覆蓋玻璃黑色點(diǎn)的相反面,并立即放在四根針上。輕柔按下,再次觀(guān)察彩色邊紋。
液滴會(huì)在平盤(pán)的整個(gè)區(qū)域擴(kuò)散成厚度10微米的薄層。 只要針沒(méi)有被淹沒(méi),多余的不會(huì)影響正常的分析。
一旦覆蓋玻璃就位,避免觸摸、抬起以及再次覆蓋。因?yàn)檫@會(huì)改變腔室內(nèi)精子的平均分布。
用把手拿起腔室并放置在顯微鏡平臺(tái)上??赡苄枰们皇?jiàn)A頭來(lái)進(jìn)行固定。
四、特別注意事項(xiàng) 1,絕對(duì)不要對(duì)此腔室使用40* 物鏡。這樣蓋玻片在聚焦時(shí)會(huì)被破壞。
2,即使使用合適的20* 物鏡,也要小心不要壓到覆蓋玻璃上。 一般當(dāng)物鏡末端距離表面1mm的時(shí)候,圖像是清晰的。
如果因?yàn)椴徽_的使用顯微鏡導(dǎo)致覆蓋玻璃損壞,我們不會(huì)負(fù)責(zé)。 3,推薦使用20* 物鏡和10* 目鏡。
不推薦使用10* 物鏡,因?yàn)榫涌雌饋?lái)會(huì)太小,除非用20* 目鏡。 五、精子計(jì)數(shù): 如果精子太密集和活動(dòng),他們首先需要被固定。
這很容易做到,通過(guò)把樣品一部分轉(zhuǎn)移到另一個(gè)測(cè)試管。然后測(cè)試管插入50℃-60℃熱水中,大約5分鐘。
一滴充分混合的,預(yù)熱的樣品放置在腔室上并蓋上覆蓋玻璃。在格子的方格里精子頭被計(jì)數(shù),與血液學(xué)中計(jì)數(shù)血細(xì)胞的方法一樣。
在此精子的數(shù)量是最重要的,在連續(xù)一列10個(gè)方格里對(duì)其計(jì)數(shù)。數(shù)量代表了以 百萬(wàn)每毫升為單位的濃度。
在其他一列或兩列里重復(fù)此操作,以測(cè)定平均值??梢赃x擇用其他2或3滴樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)以提高計(jì)數(shù)的可靠性。
在精子缺乏癥樣品中,推薦在整個(gè)格子區(qū)域計(jì)數(shù)。 在精子聚焦之后,移動(dòng)顯微鏡平臺(tái)把各自定位在視野中心。
然后,調(diào)節(jié)腔室以使格子線(xiàn)處于水平和垂直位置。 在此搜索期間你可能會(huì)觀(guān)察到: A)精子分別是否均勻?如果不是,樣品沒(méi)有混合好。
B) 是否所有精子都在一個(gè)聚焦平面,沒(méi)有模糊?如果不是,可能表面沒(méi)有清潔或兩個(gè)表面之間有大的顆粒。 任意情況,都要從開(kāi)始重復(fù)。
六、活動(dòng)性評(píng)價(jià): 推薦在樣品準(zhǔn)備好3-5分鐘之內(nèi)進(jìn)行活動(dòng)性評(píng)價(jià),以避免從周邊移動(dòng)過(guò)來(lái)的精子的干擾。計(jì)數(shù)9或16格內(nèi)所有不能動(dòng)的精子。
然后計(jì)數(shù)相同區(qū)域內(nèi)能動(dòng)的精子且評(píng)估移動(dòng)等級(jí)+1到+4. 在格子的另一個(gè)區(qū)域重復(fù)此過(guò)程,以及另外3到4滴樣品并計(jì)算平均值。 這樣的評(píng)估比原始載玻片上的要精確很多,因?yàn)槟抢锞颖簧w玻片壓縮且活動(dòng)性被損害。
Makler精子計(jì)數(shù)板提供了標(biāo)準(zhǔn)條件,對(duì)所有分析樣品精子都可以在一個(gè)光滑的水平面自由移動(dòng)。 七、形態(tài)學(xué): 快速精子形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)可以從一個(gè)濕的未染色的樣品進(jìn)行,其包含固定的精子。
推薦使用一個(gè)相差顯微鏡。在格子的一個(gè)特定區(qū)域計(jì)數(shù)所有正常和不正常精子,且從其他樣品重復(fù)此過(guò)程以達(dá)到總計(jì)數(shù)200。
顯然,精子缺乏癥樣品掃描的精子數(shù)可以更低。腔室不適合染色的,干的樣品進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)定。
八、特殊情況: 氣泡:格子區(qū)域如果出現(xiàn)氣泡,推薦換一滴樣品,除非氣泡非常小,不影響分析。 大的灰塵顆粒,纖維等,也會(huì)通過(guò)改變空間大小來(lái)影響計(jì)數(shù),也應(yīng)該更換一滴樣品。
如果樣品沒(méi)有混合完全,高度粘稠,或腔室有顆粒或灰塵;在同一樣品不同滴之間計(jì)數(shù)會(huì)出現(xiàn)較大差別。 凝聚:在腔室里有時(shí)周?chē)木訒?huì)聚集,如果在計(jì)數(shù)之前過(guò)去了太久。
這種情況下,更換此滴樣品為適當(dāng)混合的新樣品。在個(gè)別情況下,在格子區(qū)域內(nèi)會(huì)出現(xiàn)膠狀聚集,此時(shí)應(yīng)更換樣品。
結(jié)晶:樣品時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能包含晶體,可能不會(huì)影響計(jì)數(shù),但使計(jì)數(shù)更困難。有時(shí)候,這些晶體太大,可能會(huì)損壞表面區(qū)域。
因此,分析包含晶體的樣品時(shí)需特別注意。 九、為了重復(fù)使用的清洗和準(zhǔn)備: 不要用自來(lái)水淋洗或浸泡腔室。
把刷子蘸水或非腐蝕性殺菌溶液,并擦玻璃的兩個(gè)面。然后,擠壓刷子擦掉剩下的水。
最后用無(wú)毛鏡頭紙擦干表面,盡量避免觸摸針的尖端。腔室現(xiàn)在可以重復(fù)使用了。
一般來(lái)說(shuō),一旦檢查固定,不需要改變聚焦。無(wú)需提高物鏡,簡(jiǎn)單的把腔室滑進(jìn)滑出即可。
十、附 件: ???清潔刷 ???無(wú)毛鏡頭紙 ???腔室?jiàn)A頭——在精 子。
精子計(jì)數(shù)。
一般以每毫升精液中的精子數(shù)表示。正常精子密度>20 x 106/毫升,同時(shí)也要綜合精子總數(shù)評(píng)價(jià)精子的數(shù)量才夠全面,總數(shù)大于 45 x106/—次射精。
其異常常見(jiàn)于各種原因?qū)е碌牟G丸生精功能下降、精 索靜脈曲張、有害金屬和放射性損害等。精子數(shù)量減少,可因精子進(jìn)人子 宮腔及輸卵管的機(jī)會(huì)減少而致生育力低下或不育。
如精子計(jì)數(shù)大于250 x 106/毫升為精子過(guò)多,因其活動(dòng)力受影響也可能導(dǎo)致不育。精液中無(wú)精子 為無(wú)精子癥,應(yīng)離心確定在沉渣中無(wú)精子,傾去精漿后將沉渣重新懸浮, 經(jīng)系統(tǒng)和徹底檢查后發(fā)現(xiàn)無(wú)精子,才能作出無(wú)精子的診斷。
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