中藥注射滅菌方法(制備中藥注射劑的常用方法)

1.制備中藥注射劑的常用方法有哪些

中藥注射劑是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和方法，從中藥、天然藥物的單方、復(fù)方制劑中提取的有效物質(zhì)制成滅菌制劑，是臨床中治療急重癥的一種較好的速效制劑。

它改變了以往中醫(yī)中藥傳統(tǒng)的給藥方式，結(jié)合了注射劑劑量準(zhǔn)確、療效迅速獨(dú)特的劑型優(yōu)點(diǎn)，給臨床使用中草藥帶來了更廣闊的前景。近年來，中藥注射劑品種日益增多，使用范圍愈加廣泛，在其制備技術(shù)及質(zhì)量控制等方面均有所發(fā)展與提高。

但由于中藥材原料品種、產(chǎn)地、成分本身的復(fù)雜性，中藥注射劑的組分、劑量的特殊性及制備工藝、分析技術(shù)的限制等原因，近年來在臨床用藥中發(fā)現(xiàn)中藥注射劑滅菌后或在貯存過程中產(chǎn)生色澤變深、渾濁、沉淀、乳光、澄明度降低，甚至降低藥物療效、影響臨床使用等現(xiàn)象。澄明度是中藥注射劑穩(wěn)定性考核項(xiàng)目之一，也是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的主要指標(biāo)，應(yīng)該符合《中國藥典》的規(guī)定。

現(xiàn)試分析影響中藥注射劑澄明度的因素，并提出解決法。1影響中藥注射劑澄明度的主要原因1.1雜質(zhì)的存在中藥注射劑成分復(fù)雜，各廠家制備工藝不同，使有效成分的提取和雜質(zhì)除盡有較大的差異。

一般按有效成分或有效部位組方、投料的注射液，澄明度比較好，用凈藥組方、總提取物投料的注射液由于是多種成分的混合液，一些高分子化合物如色素、鞣質(zhì)、淀粉、蛋白質(zhì)、樹膠、果膠、黏液質(zhì)、樹脂等以膠態(tài)形式存在于藥液中。這些高分子化合物具熱力學(xué)不穩(wěn)定性及動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定性，致使中藥注射液在加熱滅菌時(shí)的高溫下及放置過程中，會(huì)因膠粒凝結(jié)而產(chǎn)生藥液渾濁或沉淀。

例如：鞣質(zhì)為多元酚的衍生物，溶于水和乙醇，具有還原性，其水溶液因加熱或長(zhǎng)時(shí)間放置，會(huì)氧化、聚合生成不溶于水的沉淀。鞣質(zhì)具收斂性，能與蛋白質(zhì)形成不溶性鞣酸蛋白，肌注含鞣質(zhì)的注射液，局部組織能產(chǎn)生硬結(jié)，并有牽引痛和壓迫痛。

乳光的產(chǎn)生常由于含揮發(fā)油成分的水溶性較差及成分復(fù)雜，或該成分含酚、醛活性基團(tuán)，遇光及空氣易被氧化聚合引起，同時(shí)尚可出現(xiàn)沉淀及藥液色澤變深。1.2pH值的改變藥液的pH值與注射液澄明度關(guān)系很大。

中藥中某些成分的溶解度與溶液的pH相關(guān)，若pH不適當(dāng)，則易使其穩(wěn)定性下降，產(chǎn)生沉淀。有效成分是生物堿、有機(jī)酸、酚類、苷類的，在一定的pH值條件下較為穩(wěn)定，若pH值改變，它們的溶解度也發(fā)生改變。

若pH值調(diào)節(jié)不當(dāng)，藥液的堿性較強(qiáng)時(shí)，生物堿易析出；反之，酸性較強(qiáng)時(shí)，酸性成分及部分苷類易沉淀。另外，在加熱滅菌或貯存過程中，由于一些成分易水解，如酯、苷類；一些成分易氧化，如醛類；一些成分易聚合，如酚類；從而產(chǎn)生酸性物質(zhì)使溶液的pH值逐漸下降而使原已溶解的有效成分又析出。

1.3藥液濃度過高中藥注射劑一般濃度越高，則藥液顏色愈深，溶液中有效成分及雜質(zhì)的含量也愈高。如不同濃度的復(fù)方丹參注射液在5%葡萄糖溶液中的微粒數(shù)，會(huì)隨著濃度的增加而增加。

有的注射劑雖然配制時(shí)藥液可暫時(shí)處于穩(wěn)定狀態(tài)，若溫度、pH值等條件出現(xiàn)變化，則原來已溶解的成分又析出，澄明度下降。

2.中藥注射劑滅菌應(yīng)遵循的原則是什么

一、藥學(xué)部分 1、關(guān)于“生產(chǎn)工藝”資料的要求 （1）“生產(chǎn)工藝”內(nèi)容的詳細(xì)程度。

該文件的詳細(xì)程度應(yīng)可以讓具備相應(yīng)知識(shí)的相關(guān)藥學(xué)人員能夠生產(chǎn)出質(zhì)量符合要求的產(chǎn)品，該文件可有利于保證不同批次產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，并可作為相關(guān)核查或檢查的依據(jù)。 （2）對(duì)于原輔料等要求的體現(xiàn)。

經(jīng)討論認(rèn)為，可在“生產(chǎn)工藝”后面以附注的形式，明確對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有明顯影響的相關(guān)要求，如原料、輔料、生產(chǎn)所用澄清劑、吸附劑，以及關(guān)鍵設(shè)備等。若附注較多可以編號(hào)。

如；附件1：**藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（明確藥材的產(chǎn)地、藥用部位、采收期、炮制方法和條件、質(zhì)量要求等）；附件2、**輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；附件3：生產(chǎn)中所用到的澄清劑、吸附劑等的要求；附件4：關(guān)鍵設(shè)備（如超濾膜的型號(hào)、關(guān)鍵參數(shù)等），等等。同時(shí)，可在制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后注明所用藥材的基原及藥用部位。

（3）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【制法】項(xiàng)撰寫的要求。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所列項(xiàng)目的具體要求留待以后規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)時(shí)統(tǒng)一處理，暫時(shí)不變。

2、關(guān)于工藝驗(yàn)證的要求目前工藝驗(yàn)證的評(píng)價(jià)內(nèi)容主要以注射劑的滅菌工藝為宜，其他內(nèi)容待認(rèn)識(shí)不斷豐富后再要求。 3、滅菌工藝的要求 中藥注射劑滅菌工藝的技術(shù)要求一般可參照化學(xué)藥的要求，但是，需考慮中藥注射劑的特點(diǎn)。

應(yīng)優(yōu)先選用無菌保證程度較高且不影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的滅菌工藝。如有充分依據(jù)證明申請(qǐng)品種不適宜終端滅菌且為臨床必須的品種，可考慮選擇濾過除菌、無菌生產(chǎn)工藝。

通常無菌生產(chǎn)工藝僅限于粉針劑及部分小容量注射劑。在選擇滅菌工藝條件時(shí)，應(yīng)采用指紋圖譜、含量測(cè)定、可見異物等指標(biāo)，全面考察滅菌工藝對(duì)注射劑質(zhì)量的影響。

4、輔料與藥物的相容性 相容性試驗(yàn)應(yīng)重點(diǎn)考察以下情況：（1）新輔料與藥物之間的相互作用；（2）輔料對(duì)性質(zhì)不穩(wěn)定藥物的影響；（3）已有文獻(xiàn)資料顯示，輔料與藥物之間可能存在的不良相互作用。輔料與藥物的相容性考察，應(yīng)采用指紋圖譜、含量測(cè)定、雜質(zhì)等指標(biāo)，重點(diǎn)考察加入輔料前后的改變。

5、口服樣品制備工藝合理性的評(píng)價(jià) 為了說明注射給藥途徑的合理性，需進(jìn)行注射與口服途徑的藥效對(duì)比研究。此時(shí)，口服給藥樣品制備工藝的合理性判斷原則上同一般新藥。

對(duì)于有效成分、有效部位而言，可直接以有效成分或有效部位的提取轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)選。對(duì)于源于臨床的中藥復(fù)方，可采用與臨床用藥相同的工藝，如湯劑可直接采用水煎工藝（需考慮合煎的配伍禁忌等）等，或按照新藥研究的原則與方法研究后確定，此外，需關(guān)注已知有效成分的提取情況以及工藝參數(shù)的合理性等。

二、藥理毒理部分 1、關(guān)于多成分中藥注射劑非臨床藥代動(dòng)力學(xué)探索性研究的要求 中藥注射劑藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果對(duì)臨床試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、臨床合理用藥有很大的指導(dǎo)意義。經(jīng)討論認(rèn)為，申報(bào)臨床研究的多成分中藥注射劑應(yīng)盡可能對(duì)其中的主要有效成分、毒性成分進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究。

已完成臨床試驗(yàn)申報(bào)生產(chǎn)的多成分制成的注射劑，原則上不再要求補(bǔ)充動(dòng)物的藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)研究。 2、關(guān)于首次用于注射途徑原料的有關(guān)說明，以及進(jìn)行遺傳毒性、生殖毒性及致癌性試驗(yàn)的問題經(jīng)討論認(rèn)為，中藥注射劑原料是指處方中的藥材、飲片、提取物、有效部位、有效成分。

中藥注射劑的原料未曾在已上市中藥注射劑中使用過的，或雖使用過，但由于制備工藝不同導(dǎo)致物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生變化的，均需要提供遺傳毒性、生殖毒性等試驗(yàn)資料，必要時(shí)尚需提供致癌性試驗(yàn)資料。 關(guān)于遺傳毒性、生殖毒性等特殊毒性試驗(yàn)資料階段性提供的問題。

經(jīng)討論認(rèn)為，原料為新的有效成分的注射劑，原料來源于新的藥材的注射劑，應(yīng)在上市前完成全部的生殖毒性試驗(yàn)和遺傳毒性試驗(yàn)。目前已獲臨床批件的其他符合上述需要進(jìn)行試驗(yàn)的受試物均應(yīng)完成遺傳毒性試驗(yàn)，并在上市前應(yīng)完成I段生殖毒性試驗(yàn)和至少一種動(dòng)物的Ⅱ段生殖毒性試驗(yàn)；對(duì)于未完成全部生殖毒性試驗(yàn)的，批準(zhǔn)上市時(shí)應(yīng)在說明書中注明“本品沒有完成全部生殖毒性試驗(yàn)，未觀察對(duì)子代的安全性”；上市后，繼續(xù)完成其他段的生殖毒性試驗(yàn)。

致癌性試驗(yàn)可根據(jù)藥效學(xué)試驗(yàn)、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)結(jié)果，以及臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的可疑情況確定是否需要進(jìn)行。 3、申報(bào)臨床試驗(yàn)的注射劑在非臨床有效性研究中，增加口服或其他非注射給藥途徑進(jìn)行對(duì)照的原則要求原則上，用于對(duì)照的口服或其他非注射給藥途徑的受試物，應(yīng)采用適合具體給藥途徑的合理的制備工藝，非注射給藥途徑與注射給藥途徑的給藥劑量應(yīng)通過各自的預(yù)試驗(yàn)來確定，不得采用有效劑量以下的劑量，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)進(jìn)行全面的分析，以充分說明選擇注射給藥途徑的合理性。

三、臨床部分 1、立題依據(jù)、風(fēng)險(xiǎn)控制計(jì)劃及臨床對(duì)照相關(guān)問題 關(guān)于完成臨床試驗(yàn)現(xiàn)已申報(bào)生產(chǎn)的品種，對(duì)立題依據(jù)方面不做進(jìn)一步要求，但需要補(bǔ)充風(fēng)險(xiǎn)控制計(jì)劃。對(duì)于處方中含有已上市中藥注射劑處方的品種，若原批件要求進(jìn)行對(duì)比性研究，則申報(bào)單位必須按批件要求進(jìn)行相關(guān)研究。

2、臨床試驗(yàn)相關(guān)要求 中藥注射劑臨床研究的樣本數(shù)應(yīng)符合法規(guī)規(guī)定的最低病例數(shù)要求和生物統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，臨床試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)具有生物統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和臨床意義。對(duì)已獲得臨床研究批件，。

3.滅菌方法有哪些

1.干熱滅菌法

1.1灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于接種工具滅菌，在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次，利用火焰對(duì)管口等進(jìn)行滅菌，阻止管口污染，作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。

1.2干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃，玻璃量具易變形。降溫過速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時(shí)裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動(dòng)，過密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。

2.濕熱滅菌法

通過加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強(qiáng)，溫度高，滅菌效果最好。

注意事項(xiàng)：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時(shí)，在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時(shí)，為保證達(dá)到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。否則，雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。

3.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。

紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時(shí)間、溫度與濕度等因素有關(guān)。

我國規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過100h，則應(yīng)更換。表面有塵土，降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對(duì)濕度40%~60%為宜。

4.常用的滅菌方法有哪些,各有哪些優(yōu)缺點(diǎn)

(1)加熱滅菌法 利用高溫來殺死微生物（超過最高生長(zhǎng)溫度）的方法。

加熱滅菌的原理：當(dāng)高溫作用于微生物時(shí)，首先引起細(xì)胞內(nèi)生理生化反應(yīng)速率加快，機(jī)體內(nèi)對(duì)溫度敏感的物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核酸等，隨著溫度的增高而遭受不可逆的破壞，盡而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)體的變化、酶結(jié)構(gòu)的破壞，從而使細(xì)胞失去了生活機(jī)能上的協(xié)調(diào)，停止了生長(zhǎng)發(fā)育。隨著高溫的繼續(xù)作用，細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)便發(fā)生凝固，酶結(jié)構(gòu)完全破壞，活動(dòng)消失，生化反應(yīng)停止，滲透交換等新陳代謝活動(dòng)消失，細(xì)胞死亡。

加熱滅菌可分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。 1）干熱滅菌 利用灼燒或干熱空氣滅菌而沒有飽和水蒸氣參加的滅菌法稱為干熱滅菌法。

由于干熱滅菌使用方便，方法簡(jiǎn)單，故在生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。如火焰滅菌法：直接利用火焰把微生物燒死，故又稱焚燒滅菌法。

采用此法滅菌既徹底又迅速，但只適用于金屬制的接種工具、試管口及污染物品等的處理。熱空氣滅菌法：即在電熱恒溫干燥箱中利用干熱空氣來滅菌。

2）濕熱滅菌 即利用蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。濕熱滅菌又分為高壓、常壓、間歇滅菌和巴氏滅菌4種。

①高壓蒸汽滅菌 由于高壓蒸汽具有較強(qiáng)的穿透力和較常壓高的溫度，能大大縮短滅菌時(shí)間，提高工作效率，加之蛋白質(zhì)在濕熱條件下容易變性，在熱蒸汽條件下，細(xì)菌的芽孢在120℃，經(jīng)20~30分鐘可全部被殺死。如滅菌材料體積較大，不易被穿透時(shí)，可將壓力增加到0.152兆帕，延長(zhǎng)至1~2小時(shí)。

在高壓蒸汽滅菌中，滅菌溫度隨蒸汽壓力的增加而升高（圖2-6）。 圖2-6 高壓蒸汽滅菌鍋 在使用高壓滅菌鍋時(shí)，要完全排出鍋內(nèi)的空氣而以飽和蒸汽代之。

如果空氣不排除干凈，則鍋內(nèi)溫度將低于同樣壓力下由純飽和蒸汽產(chǎn)生的溫度，影響滅菌效果。 此法適用于各種耐熱物品的滅菌，如一般培養(yǎng)基、生理鹽水等各種溶液、玻璃器皿、工作服等。

所采用的蒸汽壓力與時(shí)間，應(yīng)根據(jù)待滅菌物品的性質(zhì)、體積與容器類型等決定。 ②常壓蒸汽滅菌 這是采用自然壓力、100℃蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。

它設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低，當(dāng)前使用最廣泛。只要砌一個(gè)爐灶，買1~2只大鍋，上面用磚和水泥砌成，也可用大鐵桶、木桶等，體積大小可自行決定，但不宜過大，以裝800~1500瓶為好。

設(shè)計(jì)常壓灶時(shí)應(yīng)注意的問題：大小根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來定，灶頂部最好制成拱圓形，這樣冷凝水可沿灶的內(nèi)壁下流而不會(huì)打濕棉塞；灶倉內(nèi)要有層架結(jié)構(gòu)，以便分層裝入滅菌物；灶上應(yīng)安裝溫度計(jì)，可隨時(shí)觀察灶內(nèi)溫度的變化；因滅菌時(shí)間長(zhǎng)，鍋內(nèi)水不夠蒸發(fā)，故容量大的灶要安裝加水裝置；灶倉的密閉程度要盡可能高，這樣既提高滅菌效果，又節(jié)省燃料。菇農(nóng)在生產(chǎn)中還常用一種小型蒸汽發(fā)生裝置，引出蒸汽后直接通到下邊用木條塹起、四周用多層塑料布密封的菌袋堆中進(jìn)行常壓滅菌。

這種方法不用建灶，簡(jiǎn)便省工（圖2-7）。常壓滅菌一般水燒開后保持8~10小時(shí)，悶一夜即可。

圖2-7 簡(jiǎn)易常壓滅菌法 ③常壓間歇蒸汽滅菌法 這是利用常壓蒸汽反復(fù)幾次滅菌的方法。具體做法是將待滅菌物品放在鍋內(nèi)，100℃處理1小時(shí)左右，殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，讓其冷卻至30℃左右，此時(shí)芽胞會(huì)萌發(fā)，再以同樣方法加熱處理，反復(fù)3次，可達(dá)到滅菌目的。

該方法可用于不耐高溫的藥品、營(yíng)養(yǎng)物、特殊培養(yǎng)基的滅菌。 ④低溫巴氏滅菌法 即在60~70℃下，經(jīng)一定時(shí)間，殺死有害微生物的方法。

適應(yīng)于不耐高溫的物品消毒。有些培養(yǎng)基，在高溫下遭到破壞，用此法既可殺死致病微生物的營(yíng)養(yǎng)體，又能使培養(yǎng)基的成分不致受到嚴(yán)重破壞。

食用菌生產(chǎn)中培養(yǎng)料堆積發(fā)酵工藝，就是利用這個(gè)原理殺死其中的病蟲、雜菌。 （2）過濾除菌法 又分液體過濾和空氣過濾兩種，就是采用機(jī)械的方法，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子，做成各種過濾器，通過機(jī)械過濾，只讓液體培養(yǎng)基或空氣從篩孔流出，各種微生物菌體則留在篩子上，從而達(dá)到除菌的目的。

這種方法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基（如動(dòng)物血清、蛋白質(zhì)、酶、維生素等）及氣體的滅菌。超凈工作臺(tái)的工作原理就是將帶菌空氣通過過濾滅菌形成無菌空氣，從風(fēng)洞中吹出，來造成工作臺(tái)范圍的無菌狀態(tài)。

過濾滅菌的最大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。常用的過濾器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉膠、硝化纖維素濾膜制成的。

（3）輻射滅菌法 利用輻射產(chǎn)生的能量進(jìn)行殺菌的方法稱輻射滅菌。輻射可分電離輻射和非電離輻射兩種，α-射線、β-射線、γ-射線、X-射線、中子和質(zhì)子、微波等屬電離輻射，紫外線、臭氧、日光為非電離輻射。

1）紫外線滅菌 紫外線殺菌的原理是利用紫外線的輻射作用。用燈管直接照射細(xì)菌使其發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，將細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)誘導(dǎo)形成胸腺嘧啶雙聚體，從而抑制DNA的復(fù)制而發(fā)生變性、致死。

另一方面，空氣在紫外線照射下產(chǎn)生的臭氧（O3），也具有一定的殺菌作用。紫外線的有效作用距離為1.2~2.0米。

紫外燈一般懸吊在接種室或培養(yǎng)室的上方，個(gè)數(shù)依房間大小而定，容1~2個(gè)人操作的接種室，安裝一個(gè)30瓦的紫外燈就可以了。在每次接種前，應(yīng)將所需的器具一起放入接種室（箱）內(nèi)，然后打開紫外燈照射。

如果接種室體積較大，開燈照射2小時(shí)。