分離純化細菌的方法(分離純化微生物的方法)

1.分離純化微生物的方法有哪些

主要有

1、稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋?zhuān)ㄈ?:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分別取不同稀釋液少許，來(lái)與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻后，傾入滅過(guò)菌的培養皿中，待瓊脂凝固后制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時(shí)間即可出現菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個(gè)菌落，自這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

2.、稀釋涂布平板法

將已熔化的培養基倒入無(wú)菌平皿，制成無(wú)菌平板，冷卻凝固后，將一定量的微生物懸液滴知加在平板表面，再用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個(gè)平板表面，經(jīng)培養后挑取單個(gè)菌落。

3、平板劃線(xiàn)法

將微生物樣品在固體培養基表面多次作“由點(diǎn)到線(xiàn)”稀釋而達到分離。

4、稀釋搖管法

先將一系列盛無(wú)菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)嚬苎杆贀u動(dòng)均勻，冷凝后，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和道空氣隔開(kāi)。

2.求細菌分離純化的詳細方法

用固體培養基分離和純化

方法1：稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋?zhuān)ㄈ?:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分別取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻后，傾入滅過(guò)菌的培養皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時(shí)間即可出現菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

方法2： 涂布平板法

因為將微生物懸液先加到較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且采用稀釋倒平板法也會(huì )使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長(cháng)，因此在微生物學(xué)研究中常用的純種分離方法是涂布平板法。其做法是先將已熔化的培養基倒入無(wú)菌平皿，制成無(wú)菌平板，冷卻凝固后，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個(gè)平板表面，經(jīng)培養后挑取單個(gè)菌落（圖1）。

方法三：平板劃線(xiàn)法

最簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線(xiàn)法，即用接種環(huán)以無(wú)菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行連續劃線(xiàn)（圖2），微生物細胞數量將隨著(zhù)劃線(xiàn)次數的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線(xiàn)適宜的話(huà)，微生物能一一分散，經(jīng)培養后，可在平板表面得到單菌落。有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細胞繁殖而來(lái)的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作“由點(diǎn)到線(xiàn)”稀釋而達到分離目的的。劃線(xiàn)的方法很多，常見(jiàn)的比較容易出現單個(gè)菌落的劃線(xiàn)方法有斜線(xiàn)法、曲線(xiàn)法、方格法、放射法、四格法等。

方法四：稀釋搖管法

用固體培養基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露于空氣中不立即死亡，可以采用通常的方法制備平板，然后置放在封閉的容器中培養，容器中的氧氣可采用化學(xué)、物理或生物的方法清除。對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則可采用稀釋搖管培養法進(jìn)行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。先將一系列盛無(wú)菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)嚬苎杆贀u動(dòng)均勻，冷凝后，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開(kāi)。培養后，菌落形成在瓊脂柱的中間。進(jìn)行單菌落的挑取和移植，需先用一只滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一只毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無(wú)菌無(wú)氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養皿中，用無(wú)菌刀將瓊脂柱切成薄片進(jìn)行觀(guān)察和菌落的移植。

資料：?jiǎn)蝹€(gè)微生物在適宜的固體培養基表面或內部生長(cháng)、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結構的子細胞生長(cháng)群體，稱(chēng)為菌落。當固體培養基表面眾多菌落連成一片時(shí)，便成為菌苔。不同微生物在特定培養基上生長(cháng)形成的菌落或菌苔一般都具有穩定的特征，可以成為對該微生物進(jìn)行分類(lèi)、鑒定的重要依據。大多數細菌、酵母菌、以及許多真菌和單細胞藻類(lèi)能在固體培養基上形成孤立的菌落，采用適宜的平板分離法很容易得到純培養。所謂平板，即培養平板的簡(jiǎn)稱(chēng)，它是指固體培養基倒入無(wú)菌平皿，冷卻凝固后，盛固體培養基的平皿。這方法包括將單個(gè)微生物分離和固定在固體培養基表面或里面。固體培養基用瓊脂或其它凝膠物質(zhì)固化的培養基，每個(gè)孤立的活微生物體生長(cháng)、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分離、培養微生物的固體培養基是瓊脂固體培養基平板。這種由Kock建立的采用平板分離微生物純培養的技術(shù)簡(jiǎn)便易行，100多年來(lái)一直是各種菌種分離的最常用手段。

3.細菌分離培養的方法有哪些

細菌分離培養的方法有哪些

如果是液體培養基，那分離起來(lái)就比較困難，要用到專(zhuān)門(mén)的凍干設備，還要加很多柔和的保護性物質(zhì)。 所以在一般的情況下最好的辦法是把細菌接種到固體培養基上，這樣長(cháng)出來(lái)的菌落或菌苔就是你所要分離出的細菌了。

原理：通過(guò)在平板上劃線(xiàn)，將混雜的細菌在瓊脂平板表面充分的分散開(kāi)，使單個(gè)細菌能固定在一點(diǎn)上生長(cháng)繁殖，形成單個(gè)菌落，以達到分離純種的目的。若需從平板上獲取純種，則挑取一個(gè)單個(gè)菌落作純培養。

4.微生物的分離與純化的常用方法有哪些

分離： 稀釋倒平皿法 平板劃線(xiàn)法 單細胞挑取法 利用選擇培養基分離法 純化： 1、若是你不知道你所要純化的微生物的特征，最簡(jiǎn)單的不知道它的菌落特征和形態(tài)大小，那現根據你要分離菌的特性，找適合的初篩培養基，找到你要純化的菌。

如纖維素菌，你在培養基中加纖維素粉或CMC-Na作碳源，這樣就可以篩選出分解纖維素的菌。然后再用下面的方法繼續純化。

2、若你知道目標菌的形態(tài)，可以直接挑混合菌劃平板，直到長(cháng)出當個(gè)菌落，并且在鏡下沒(méi)有雜菌即可；或者挑菌稀釋涂布得到當個(gè)菌落也行。