細菌的代謝產(chǎn)物實驗(細菌溶解產(chǎn)物的注意事項)

1.細菌溶解產(chǎn)物的注意事項

1.如服用本品后出現(xiàn)高熱（39℃以上，孤立于病史）， 特別在治療開始時，應(yīng)停止使用本品，并咨詢醫(yī)生。應(yīng) 基于喉部、鼻部或耳部癥狀進行判斷，熱型應(yīng)于原發(fā)疾 病引起的發(fā)熱鑒別。2.有報道服用含細菌提取物藥物的易感患者中觀察到哮 喘發(fā)作的表現(xiàn)。在這些病例，不應(yīng)繼續(xù)服用本品。3.如有持續(xù)胃腸、呼吸系統(tǒng)反應(yīng)，應(yīng)停止使用本品，并 咨詢醫(yī)生。4.本品可能導(dǎo)致過敏反應(yīng)，如服用本品后出現(xiàn)皮膚反 應(yīng)，應(yīng)停止使用本品，并咨詢醫(yī)生。

2.細菌的哪些代謝產(chǎn)物對細菌鑒定有意義

其實意義不是很大，一般是根據(jù)《伯氏細菌手冊》看的，不過現(xiàn)在基本上都是用16S RNA來鑒定，要精確一些。

舉例如下：（1）細菌生化試驗 各種細菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同，對營養(yǎng)基質(zhì)的分解能力也不一樣，因而代謝產(chǎn)物或多或少地各有區(qū)別，可供鑒別細菌之用。用生化試驗的方法檢測細菌對各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物，從而鑒別細菌的種屬，稱之為細菌的生化反應(yīng)。

（2）糖（醇）類發(fā)酵試驗 不同的細菌含有發(fā)酵不同糖（醇）的酶，因而發(fā)酵糖（醇）的能力各不相同。其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同，如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判定。在配制培養(yǎng)基時預(yù)先加入溟甲酚紫[P HS . 2 （黃色）一6 . 8 （紫色）] ，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時，可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。

氣體產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來證明。（3）甲基紅（Methylred ）試驗（該試驗簡稱MR 試驗） 很多細菌，如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再被分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基的pH 降低到4 . 2 以下，這時若加甲基紅指示劑呈現(xiàn)紅色。

因甲基紅指示劑變色范圍是pH4 . 4 （紅色）一pH6 . 2 （黃色）。若某些細菌如產(chǎn)氣桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，但很快將丙酮酸脫梭，轉(zhuǎn)化成醇等物，則培養(yǎng)基的pH 仍在6 . 2 以上，故此時加入甲基紅指示劑，呈現(xiàn)黃色。

（4）大分子物質(zhì)代謝實驗. 靛基質(zhì)（口引睬）試驗 某些細菌，如大腸桿菌，能分解蛋白質(zhì)中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)（叫睬），靛基質(zhì)與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成玫瑰色靛基質(zhì)（紅色化合物）。硫化氫試驗 某些細菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），產(chǎn)生硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色沉淀硫化鉛或硫化鐵。

為硫化氫試驗陽性，可借以鑒別細菌。明膠液化實驗 某些細菌具有膠原酶，使明膠被分解，失去凝固能力，呈現(xiàn)液體狀態(tài)，是為陽性。

淀粉水解試驗（在紫外誘變中做，本實驗不做） 細菌對大分子的淀粉不能直接利用，須靠產(chǎn)生的胞外酶（淀粉酶）將淀粉水解為小分子糊精或進一步水解為葡萄糖（或麥芽糖），再被細菌吸收利用，細菌水解淀粉的過程可通過底物的變化來證明，即用碘測定不再產(chǎn)生藍色。（5）有機酸鹽及氨鹽利用試驗 檸檬酸鹽利用試驗 檸檬酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基，其中檸檬酸鈉為碳的唯一來源。

而磷酸二氫按是氮的唯一來源。有的細菌如產(chǎn)氣桿菌，能利用檸檬酸鈉為碳源，因此能在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長，并分解檸檬酸鹽后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。

此時培養(yǎng)基中的溟廖香草酚藍指示劑由綠色變?yōu)樯钏{色。不能利用檸檬酸鹽為碳源的細菌，在該培養(yǎng)基上不生長，培養(yǎng)基不變色。

2、實驗儀器，材料和用具 （1）實驗儀器37OC 恒溫培養(yǎng)箱、20OC 恒溫培養(yǎng)箱（室溫代替）。（2）微生物材料 大腸桿菌、變形桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣桿菌這四種菌種的斜面各1 支。

（3）試劑 甲基紅試劑、V . P 試劑、叫噪試劑、格里斯試劑（硝酸鹽利用試驗）、盧戈氏碘液（淀粉水解試驗） （4）實驗用具 試管：每份每個試驗2 根試驗，1 根對照，8 個試驗共27 根。無菌乎皿：每份2 個 杜氏小管：每份6 個。

接種環(huán)、酒精燈、試管架、記號筆。（5）培養(yǎng)基 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基：何份各6 支試管，何支5 一10mi 培養(yǎng)基，滅菌。

用于糖類發(fā)酵試驗。葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基：每份3 支試管，何支5 一10mi 培養(yǎng)基，滅菌。

用于甲基紅和V . P 試驗。胰蛋白水培養(yǎng)基：每份3 支何支5 一10mi 培養(yǎng)基，滅菌。

用于叫睬試驗。檸檬酸鐵錢或醋酸鉛的半固體培養(yǎng)基；每份3 支，每支5 一10ml 培養(yǎng)基，滅菌。

用于硫化氫試驗。營養(yǎng)明膠培養(yǎng)基：每份3 支，每支.5 一10ml 培養(yǎng)基、滅菌。

用于明膠液化試驗。淀粉培養(yǎng)基：每份2 個平皿，每平皿約20ml 培養(yǎng)基，滅菌后倒入平皿。

用于淀粉水解試驗。檸檬酸鈉培養(yǎng)基：每份3 支，每支5 一IOml 培養(yǎng)基，滅菌，做斜面。

用于檸檬酸鹽利用試驗。3、實驗步驟 （1）糖（醇）類發(fā)酵試驗 編號在各試管上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱，所接種的菌名和組號，下同。

接種取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基3 支，按編號1 支接種大腸桿菌，另1 支接種普通變形桿菌，第3 支不接種，作為對照C 同樣取3 支乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，1 支接種大腸桿菌，1 支接科普通變形桿菌，第3 支不接種，作為對照。將己接種好的培養(yǎng)基置37OC 溫箱中培養(yǎng)24h 。

觀察結(jié)果：被檢細菌若能發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖時，則使培養(yǎng)基的pH 降低，這時培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應(yīng)（為黃色），若發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則培養(yǎng)基不僅顯酸色反應(yīng)，并且在培養(yǎng)基中倒置的小玻璃管（杜氏小管）中有氣體。氣體占整個倒置小玻管的10 %以上。

若被檢細菌不分解培養(yǎng)基中的糖，則培養(yǎng)基不發(fā)生變化。（2）甲基紅試驗（MR 試驗） 將大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌分別接種到葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基中，37OC 培養(yǎng)48h ，加甲基紅指示劑數(shù)滴，觀察結(jié)果，呈現(xiàn)紅色者為陽性，呈現(xiàn)黃色者為陰性。

（3）伏一普二氏試驗（V . P .試驗） 將被檢菌接種到葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基中，37OC 培養(yǎng)48h ，取出，加入40 % KOlls 一10 滴，然后再加入等量的5 %。一蔡酚溶液，用力振蕩，再放入37OC 溫箱中保溫巧一30min 。