薄層色譜點樣有哪些(薄層色譜點樣時應(yīng)注意哪些問題?)
1.薄層色譜點樣時應(yīng)注意哪些問題?
點樣
用打孔器把濾紙制成直徑2毫米的小園片，隨后把小園片戳附在小號縫衣針的針尖
上，其大頭部分固定在軟木塞上，用微量注射器吸取酒樣和配制的標準溶液，緩慢地點
加在小園濾紙片上，邊點加邊用吹風(fēng)機以100℃以上的熱風(fēng)把點樣吹干。
在活化并經(jīng)過冷卻的薄層板上，用縫衣針的大頭把硅膠薄層摳掉一小孔，直徑略小
于2毫米，在小孔中用少許淀粉漿糊，把點加的酒樣或標準溶液的濾紙片粘附于小孔上。
希望對你有所幫助！
2.薄層色譜操作注意事項
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薄層色譜操作注意事項
影響薄層色譜分析的因素有很多，比如樣品處理方法、薄層板制備技巧、點樣方法、展開劑的遴選、溫濕度的掌控等等很多方面，在這里對其操作要點作一下簡單介紹：
1鋪制薄層板：鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G：水=1:2~3，硅膠G：羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。2點樣：盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。
薄層色譜用于定量時，點樣是最主要的誤差來源。
供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點樣的同時，樣品在原點就可是成環(huán)形展開，原點直徑的擴散促進了這種展開，3
3.薄層色譜基本操作有哪幾個關(guān)鍵技術(shù) 各項操作應(yīng)該注意什么
薄層色譜（Thin Layer Chromatography）常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進行化學(xué)反應(yīng)時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。
薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10*3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。
注意事項：
1鋪制薄層板：鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G：水=1:2~3，硅膠G：羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。 2點樣：盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。 薄層色譜用于定量時，點樣是最主要的誤差來源。 供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點樣的同時，樣品在原點就可是成環(huán)形展開，原點直徑的擴散促進了這種展開，Kaiser稱之為“上樣環(huán)形色譜效應(yīng)”。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環(huán)。這種效應(yīng)對隨后的先行展開造成很不利的影響。 供試液的溶劑在原點的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點吸收大氣中的水分（特別在高濕度環(huán)境）對色譜的影響也不可低估。因此點樣時的同步干燥或繼后干燥以除去原點殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，如用吹風(fēng)筒加熱，樣品變?yōu)楣虘B(tài)后，部分或全部強烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進了硅膠的有催化作用的活性表面故態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品的變性（尤其熱不穩(wěn)定物質(zhì)），至少移動相在展開時對這部分樣品的溶解速度比移動速度慢得多而形成拖尾（斑點拖尾的原因之一）。
3 展開劑配制 選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達到實驗室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標移液管，移液管應(yīng)符合計量認證要求，盡管多數(shù)時候這不是必須的。 4 展開系統(tǒng)的飽和 一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動作應(yīng)該盡量輕、快。 5 溫濕度的控制 溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。 6 TLC通用顯色方法 通用顯色方法主要有： 1、紫外照射法：方便、不破壞樣品； 2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用； 3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯； 4、硫酸溶劑：對絕大多數(shù)有機物有效，但有破壞性。
4.薄層色譜法點樣應(yīng)注意些什么
薄層色譜法點樣應(yīng)注意：用毛細管吸取樣品溶液，垂直地輕輕地觸到薄層的起點線上，如溶液太稀，一次點樣不夠，第一次點樣干后，再點第二次，第三次；多次點樣時，每次都應(yīng)點在同一圓心上；若樣品量太少時，成分不易顯出；樣品量太多時易造成斑點過大，互相交叉或拖尾，不能得到很好的分離。
薄層色譜法（TLC），系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，根據(jù)比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比，用以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。
薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù)，也用于跟蹤反應(yīng)進程。
5.色譜分離技術(shù)中,薄層色譜的基本操作過程及注意事項
薄層色譜操作注意事項
影響薄層色譜分析的因素有很多，比如樣品處理方法、薄層板制備技巧、點樣方法、展開劑的遴選、溫濕度的掌控等等很多方面，在這里對其操作要點作一下簡單介紹：
1鋪制薄層板：鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G：水=1:2~3，硅膠G：羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。
2點樣：盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。
薄層色譜用于定量時，點樣是最主要的誤差來源。
供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點樣的同時，樣品在原點就可是成環(huán)形展開，原點直徑的擴散促進了這種展開，Kaiser稱之為“上樣環(huán)形色譜效應(yīng)”。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環(huán)。這種效應(yīng)對隨后的先行展開造成很不利的影響。
供試液的溶劑在原點的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點吸收大氣中的水分（特別在高濕度環(huán)境）對色譜的影響也不可低估。因此點樣時的同步干燥或繼后干燥以除去原點殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，如用吹風(fēng)筒加熱，樣品變?yōu)楣虘B(tài)后，部分或全部強烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進了硅膠的有催化作用的活性表面故態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品的變性（尤其熱不穩(wěn)定物質(zhì)），至少移動相在展開時對這部分樣品的溶解速度比移動速度慢得多而形成拖尾（斑點拖尾的原因之一）。
