紫外吸收法測蛋白質(估計蛋白質濃度120mg/ml,如何用紫外線法測定蛋白質含量)
1.估計蛋白質濃度120mg/ml,如何用紫外線法測定蛋白質含量
您好！
① 1mg/ml蛋白質濃度OD280約為1。
② OD值在0.2-0.8之間與蛋白濃度線性最好。
③ 因此120mg/ml的濃度，稀釋150-600倍之間測試比較合適。
④ 測試蛋白濃度，因考慮核酸的影響，因此應該同時測定OD280及OD260，如果A280/A260>2，此時可以忽略核酸的影響； 如果A280/A260
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2.生物化學實驗紫外法測定蛋白質含量中哪些不良操作會對實驗結果產(chǎn)生
實驗二、紫外分光光度法測定蛋白質含量
【實驗目的】
1.掌握紫外分光光度法測定蛋白質含量的原理和方法
2.掌握紫外光分光光度計使用
【實驗原理】
蛋白質中含有酪氨酸、色氨酸等氨基酸殘基，在紫外光280nm波長處有最大吸收峰，故可用280nm的光吸收值（即光密度的大?。﹣頊y定蛋白質的含量。
由于核酸在280nm也有光吸收，對蛋白質的測定有干擾作用。但核酸的最大吸收峰在260nm，如同時測定260nm的光吸收，通過計算可以消除其對蛋白質測定的影響，因此溶液中存在核酸時，必須同時測定280nm和260nm的光密度，方向通過計算測得溶液中的蛋白質濃度。
【實驗操作】
1、稀釋血清（或其他蛋白質溶液），準確吸取0.1mL血清，置于50mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度（即500倍）。
2、測定光密度在紫外分光光度計上，將稀釋的蛋白質溶液倒入石英比色杯中，用生理鹽水做對照，測得280nm和260nm兩個波長的光密度。
【計算】
將測得280nm和260nm波長的光密度值按下列經(jīng)驗公式計算蛋白質濃度。
蛋白質濃度（mg/mL）=1.45D280-0.74D260
【附注】
1、不同的蛋白質和核酸的光吸收率不完全是恒定不變，所以可能產(chǎn)生誤差。另外核酸中的嘌呤堿，嘧啶堿在波長260nm和280nm都有光吸收作用。所以核酸的含量在20%以下，D280/D260>1.5時，方可以使用上述公式。
2、本法對于微量蛋白質的測定即快又方便，它還適應于用硫酸銨或其他鹽類提純的蛋白質樣品（這種蛋白質樣品含多種鹽類混雜，用其他方法測定比較困難）。
3、如純系蛋白質樣品，可根據(jù)該蛋白質在280nm附近標準吸光系數(shù)，直接測定該蛋白質的含量。如牛血清白蛋白的EI280（%)為6.3測定時，按下列公式計算。
樣品中牛血清白蛋白濃度（mg/mL）=D280/6.3*10
4、為簡便起見，對于混合蛋白質溶液，可用D280乘以0.75來代表其中蛋白質的大致含量（mg/mL）。
3.求 怎樣用紫外分光光度法測蛋白質含量
1、280nm的光吸收法
用標準曲線法進行測定。標準蛋白質溶液配制的濃度為1.0 mg/mL。常用的標準蛋白質為牛血清清蛋白（BSA）。
2、280 nm和260 nm的吸收差法
核酸對紫外光有很強的吸收，在280 nm處的吸收比蛋白質強10倍（每克），但核酸在260 nm處的吸收更強，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm處的消光系數(shù)是280 nm處的2倍；而蛋白質則相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。
3、215 nm與225 nm的吸收差法
蛋白質的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收測定時，可用215nm與225 nm吸收值之差，通過標準曲線法來測定蛋白質稀溶液的濃度。
4、肽鍵測定法
蛋白質溶液在238 nm處的光吸收的強弱，與肽鍵的多少成正比。因此可以用標準蛋白質溶液配制一系列50~500 mg/mL已知濃度的5.0 mL蛋白質溶液，測定238 nm的光吸收值A238，以A238為縱坐標，蛋白質含量為橫坐標，繪制出標準曲線。未知樣品的濃度即可由標準曲線求得。
擴展資料：
紫外分光光度法原理
光譜法（spectrometry）是基于物質與電磁輻射作用時，測量由物質內部發(fā)生量子化的能級之間的躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射輻射的波長和強度進行分析的方法。光譜法可分為發(fā)射光譜法、吸收光譜法、散射光譜法；或分為原子光譜法和分子光譜法；或分為能級譜，電子、振動、轉動光譜，電子自旋及核自旋譜等。
分光光度法是光譜法的重要組成部分，是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發(fā)光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法。常用的技術包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法等。
紫外-可見分光光度法是在190~800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用于鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。
參考資料來源：百度百科-紫外分光光度法
4.紫外吸收法測定蛋白質濃度的基本原理是什么
原理：蛋白質分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯環(huán)結構，在紫外280nm波長處有最大吸收峰，其光吸收值與蛋白質濃度成正比，故可以用280nm波長吸收值大小來測定蛋白質含量。
優(yōu)點：
1. 快速
2. 對蛋白質無破壞性
缺點：
1. 不是嚴格的定量方法。
因為此法是根據(jù)酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）殘基的強吸收值來測定的，不同的蛋白質具有不同的消光系數(shù)。 另外，當?shù)鞍踪|分子中不含Tyr、Phe或Trp殘基時，該方法就不能檢出蛋白。（此法用于測粗提總蛋白濃度較為適宜）
2. 核酸可引起強烈干擾
