簡述無菌技術(shù)注意事項(xiàng)

1.無菌操作時(shí)注意事項(xiàng)

體外培養(yǎng)細(xì)胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養(yǎng)成功或失敗的首要條件。即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室。若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，技術(shù)操作不規(guī)范，也會導(dǎo)致污染。因而.為在一切操作中為最大可能的保證無菌.每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和完全靠。

【培養(yǎng)前準(zhǔn)備】在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無誤后將其放置操作場所（培養(yǎng)室、超凈臺）內(nèi)，然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后.囚物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會。

【操作野消毒】無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次（拖布要專用）.紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺臺面每次實(shí)驗(yàn)前要用75%酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min。在工作臺面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線，消毒時(shí)工作臺面上用品不要過多或重疊放置.否則會遮擋射線降低消毒效果?！┎僮饔镁呷缫埔浩?、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內(nèi)同時(shí)紫外線消毒。

【洗手和著裝】原則上和外科手術(shù)相同。平時(shí)僅做觀察不做培養(yǎng)操作時(shí)，可穿裝細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超凈臺工作時(shí)，因整個(gè)前臂要伸入箱內(nèi)，應(yīng)著長袖的清潔工作服，并于開始操作前要用75%酒精消毒手。如果實(shí)驗(yàn)過程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。進(jìn)入原代培養(yǎng)室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。

【火焰消毒】 在無菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時(shí)間過長，以防退火，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜，再用時(shí)會把有害物帶入營養(yǎng)液中。開啟、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過高燒死細(xì)胞。另外膠塞過火焰時(shí)也不能時(shí)間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞。

【操作】 進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機(jī)會。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機(jī)會。吸取營養(yǎng)液、PBS、細(xì)胞懸液及其它各種用液時(shí)，均應(yīng)分別使用吸管，不能混用，以防擴(kuò)大污染或?qū)е录?xì)胞交叉污染。工作中不能面向操作野講話或咳嗽，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入工作臺面發(fā)生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺面及雙手。手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口，則應(yīng)將吸管丟掉。

2.做無菌技術(shù)操作時(shí)要注意什么?

無菌操作同樣是護(hù)士最基礎(chǔ)，最常用，最能體現(xiàn)護(hù)士專業(yè)水平的一項(xiàng)技術(shù)操作。

臨床護(hù)士在做任何的一項(xiàng)操作時(shí)，都能涉及到此項(xiàng)技術(shù)，所以說它是最基礎(chǔ)最常用的一項(xiàng)技術(shù)操作。無菌技術(shù)還涵蓋了下列操作內(nèi)容：無菌鉗、無菌包、無菌盤、無菌手套等。

這幾項(xiàng)操作有一定的難度，需要經(jīng)過刻苦的練習(xí)才能全面掌握。無菌技術(shù)操作要注意如下幾點(diǎn)：（1） 凡是污染的物品，必須重新滅菌后方可使用。

（2） 取出的無菌物品未用，也不可再放回?zé)o菌容器內(nèi)。（3 ）無菌鉗及容器每周消毒二次。

（4） 已打開的無菌包必須注明開包日期和時(shí)間，保存時(shí)間為二十四小時(shí)。（5 ）無菌治療盤使用時(shí)間不得超過四小時(shí)。

（6） 無菌操作時(shí)，不可穿越無菌區(qū)。（7） 無菌手套一旦發(fā)現(xiàn)破損，必須立即更換。

（8） —套無菌物品，只能一個(gè)病人使用，不能二人共同使用。

3.進(jìn)行無菌操作前應(yīng)

培養(yǎng)基的制作注意事項(xiàng)：1 注意營養(yǎng)物質(zhì)的濃度比和c/n比2 控制ph條件3 原料來源的選擇4 滅菌處理無菌操作注意事項(xiàng)：1。

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺（laminar flow） 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。每 次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間 污染。

實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間 隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。

2。 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可 以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。

實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦 拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操 作。

3。 小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。

勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打 開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。 容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用， 盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4。 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

對于來自人類或是病毒 感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺（至少class ii）。 操作過程 中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如dmso 及tpa 等，并避免尖銳 針頭之傷害等。

5。 定期檢測下列項(xiàng)目： 5。

1。 co2 鋼瓶之co2 壓力 5。

2。 co2 培養(yǎng)箱之co2 濃度、溫度、及水盤是否有污染（水盤的水用無菌水，每周更換）。

5。3。

無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及hepa 過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300 小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/hepa）。 6。

水槽可添加消毒劑（zephrin 1:750），定期更換水槽的水。

4.誰能告訴我無菌操作的具體注意事項(xiàng)

無菌技術(shù)：在執(zhí)行醫(yī)療護(hù)理抄作過程中，防止一切微生物侵入肌體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作方法和管理方法。

無菌技術(shù)操作原則：一是環(huán)境要清潔；二是進(jìn)行無菌操作時(shí)，衣帽穿戴要整潔，口罩須著住口鼻。

現(xiàn)在有人說：無菌操作沒有20分鐘就可以不戴口罩。這樣行嗎？什么是無菌技術(shù)和無菌技術(shù)操作？規(guī)章制度就得嚴(yán)格執(zhí)行，沒有規(guī)矩就不成方圓！我就親眼看見對藥時(shí)不戴口罩，邊講話邊抽藥，注意力未集中，把藥給配錯(cuò)了。

護(hù)士，儀表端莊，衣帽整潔；無菌操作時(shí)該戴口罩，該用無菌手套，正規(guī)操作，一絲不茍。自己放心，病人放心。

5.無菌技術(shù)操作的基本要求有哪些

無菌技術(shù)操作的基本要求：

1、操作前準(zhǔn)備

操作環(huán)境應(yīng)清潔、寬敞、定期消毒；物品布局合理；無菌操作前半小時(shí)應(yīng)停止清掃工作、減少走動、避免塵土飛揚(yáng)；工作人員應(yīng)做好個(gè)人準(zhǔn)備，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要時(shí)穿無菌衣、帶無菌手套。

2、操作中保持無菌

工作人員應(yīng)面向無菌區(qū)，手臂應(yīng)保持在腰部或操作臺臺面以上，不可跨越無菌區(qū)避免面對無菌區(qū)談笑、咳嗽、打噴嚏；

用無菌持物鑷取用物品。無菌物品一經(jīng)取出，即使未用，也不可放回?zé)o菌容器內(nèi)。一套無菌物品僅供一位患者使用，避免交叉感染；無菌操作中，無菌物品疑有污染或已被污染，應(yīng)予更換并重新滅菌。

3、無菌物品保管

無菌物品必須與非無菌物品分開放置；無菌物品不可暴露于空氣中，應(yīng)存放于無菌包或無菌容器中，無菌包外須標(biāo)明物品名稱、滅菌日期，并按失效期先后順序排放。

定期檢查無菌物品的滅菌日期及保存情況。無菌包在未被污染的情況下保存期一般為7天，過期或受潮應(yīng)重新滅菌。

擴(kuò)展資料：

無菌技術(shù)操作目的：

取用、放置、保存無菌物品符合無菌操作原則，保證無菌物品和無菌區(qū)域不被污染。防止病原微生物侵入或傳播給他人。

適用領(lǐng)域：

進(jìn)行微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、外科手術(shù)、換藥、注射時(shí)，均需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)定。

參考資料來源：搜狗百科——無菌技術(shù)

6.培養(yǎng)基的制作及無菌操作技術(shù)常見的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的制作注意事項(xiàng)：

1 注意營養(yǎng)物質(zhì)的濃度比和C/N比

2 控制pH條件

3 原料來源的選擇

4 滅菌處理

無菌操作注意事項(xiàng)：

1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺（laminar flow） 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %

ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。每

次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間

污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間

隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。

2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可

以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦

拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操

作。

3. 小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打

開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，

盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于來自人類或是病毒

感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺（至少Class II）。操作過程

中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳

針頭之傷害等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力

5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染（水盤的水用無菌水，每周更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300

小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽可添加消毒劑（Zephrin 1:750），定期更換水槽的水