物理消毒就是利用物理的作用(包括光、熱、蒸汽、壓力等)以殺滅病原體。
在養(yǎng)蠶生產(chǎn)中應(yīng)用較廣泛的物理消毒法有蒸汽消毒、煮沸消毒及日光消毒等。
(1)蒸汽消毒及蒸煮消毒
消毒方法與作用原理:濕熱條件下利用高溫(100℃)使病原蛋白質(zhì)變性、凝固而失去致病力。消毒對象及使用范圍:蒸汽消毒時加入少量的甲醛效果更好。蠶網(wǎng)、蠶蔟等零星的小蠶具可通過蒸煮消毒。
(2)日光消毒
作用原理:利用日光中的紫外線來殺菌。紫外線是一種波長0.32~0.40微米左右的短波光線,殺菌力強。紫外線照射后引起核酸、蛋白質(zhì)變性而失去致病力,此外,日光的紅外線有熱輻射作用,使病原微生物表面發(fā)熱干燥,能起到一定的輔助消毒作用。日光消毒的效果與物體表面溫度的高低關(guān)系很大,如溫度越高則照射的時間可適當(dāng)縮短。
消毒對象及使用范圍:日光消毒的對象比較廣泛,對各種病原微生物都有殺滅的作用。但由于只能消毒表面層,不能深入內(nèi)部,且受大氣的影響較大,日照的強度亦無法掌握。因此,只能作為蠶具的輔助消毒。在日光消毒時要注意做到將蠶具攤平,使之充分曝曬于直射日光之下,并要經(jīng)常調(diào)換正反面或多曬幾次。
進行消毒與滅菌的常用物理方法包括熱力、過濾、滲透壓、干燥、微波、輻射等。
(1) 熱力滅菌熱力滅菌是利用髙于微生物能夠忍耐的最高溫度,來破壞微生物細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的氫鍵,使蛋白質(zhì)變性,酶失去活性,生化反應(yīng)停止,滲透交換等新陳代謝發(fā)生障礙或消失,導(dǎo)致細菌細胞死亡。 熱力滅菌有干熱滅菌和濕熱滅菌之分。
① 干熱滅菌采用灼燒或干熱空氣滅菌的方法。適用于玻璃器皿和瓷器等物的滅菌,廣泛應(yīng)用于實驗室和生產(chǎn)。
a。 灼燒滅菌即通過火焰高溫灼燒進行滅菌的方法,其特點是滅菌迅速,簡便徹底,適用于需燒毀或耐熱的物品。
如接種工具、試管口和玻璃瓶口,通過火焰灼燒而滅菌,一般用酒精燈或酒精噴燈火焰進行。 嚴重污染雜菌的廢棄物品,用火焰焚毀而達到滅菌目的。
b。 熱空氣滅菌即干烤滅菌,利用加熱的高溫空氣進行滅菌的方法。
常用電熱干燥箱亦稱電烘箱加熱,它是通過電熱絲進行加溫并可調(diào)溫。將需要滅菌的物品洗滌干凈,擦去水珠,用紙包好,放到電烘箱內(nèi)加熱干燥。
干熱滅菌的溫度,一般在160~180°C之間,常用溫度為165°C,恒溫保持30分鐘至2小時即可達到滅菌的目的。然后切斷電源,待溫度降到45°C以下,即可取出使用。
對于高溫處理容易損壞的培養(yǎng)基及含水的物品,不宜用干熱滅菌方法。② 濕熱滅菌法利用蒸汽或沸水滅菌,是常用的一種滅菌法。
它不需像干熱滅菌那樣的高溫,在同一溫度下,濕熱殺菌力比干熱的殺菌力強。因為在濕熱條件下,熱蒸汽的穿透力強于干熱,微生物吸收水分,使蛋白質(zhì)易凝固變性,酶系統(tǒng)容易被破壞。
此外,當(dāng)蒸汽與被滅菌的物質(zhì)接觸凝結(jié)成水時,能放出潛在熱量,加速提高溫度,從而能增強滅菌效力,滅菌的時間也可以縮短。 因各種微生物對溫度的反應(yīng)不同,故殺滅所需要的時間和溫度的高低也不同。
濕熱滅菌又分加壓與不加壓兩種方法。a。
高壓蒸汽滅菌:是在密封的髙壓滅菌器內(nèi)注水,加熱后水沸騰產(chǎn)生蒸汽,滅菌器內(nèi)壓力不斷增高,溫度也隨之升高,利用高溫殺死微生物。使用高壓滅菌器時應(yīng)注意以下事項。
(a) 按照滅菌器要求的注水量,加水到指定的標(biāo)度,最好加入開水,一方面可縮短升溫時間,同時避免長期使用冷水鍋內(nèi)結(jié)水堿。(b) 將需要滅菌的培養(yǎng)基或器物放在滅菌器內(nèi)。
裝人的試管、菌種瓶、塑料袋等物不宜過擠,以利熱蒸汽流通,特別是袋裝培養(yǎng)基不能疊放緊壓,妨礙蒸汽滲透,造成滅菌不徹底。 需滅菌的器物裝好后,將滅菌器的蓋密封,不能漏氣,然后打開放氣閥門。
(c) 接通電源或打開鍋爐的進汽閥門加熱。(d) 排除干凈鍋內(nèi)的冷空氣,是高壓滅菌最重要又容易被人忽略的步驟。
空氣的導(dǎo)熱性能要比水蒸氣差,潛熱很小,但其熱膨脹系數(shù)較大,滅菌鍋內(nèi)存有較多的冷空氣,因此,滅菌時排出鍋中的冷空氣是非常必要的。 排放冷空氣的方法有兩種:一種是當(dāng)水加熱沸騰后空氣由已打開的放氣閥門排出,等蒸汽從氣門有力地沖出后,說明空氣已排完,可關(guān)閉氣門繼續(xù)加熱,另一種方法是加熱后不開氣門,當(dāng)氣壓表的指針上升到0。
5千克/厘米2時,打開放氣閥門,排出冷空氣,指針降至零后,再關(guān)上放氣閥繼續(xù)加熱。 (e) 當(dāng)壓力上升到所需要的指標(biāo)后,開始計算滅菌時間,滅菌過程中保持壓力穩(wěn)定,不能忽高、忽低。
特別應(yīng)該注意安全閥門,如果安全閥失靈,當(dāng)壓力超過滅菌器最大的承受能力,會出現(xiàn)意外事故。(f) 達到滅菌要求時間后,關(guān)掉熱源停止加熱,排出蒸汽使壓力慢慢下降。
排氣的速度應(yīng)適當(dāng)。若排得太快,增大瓶內(nèi)外的壓力差,滅菌器中試管或三角瓶中的培養(yǎng)基會突然沸騰,沖脫瓶塞或沾污棉花塞;排得太慢,等于延長了滅菌時間,對一些培養(yǎng)基是不利的。
瓊脂試管培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基,滅菌后去掉熱源,讓其自然排氣,當(dāng)壓力表指針降至零時方可打開鍋,一般來說,從開始排氣到打開滅菌鍋的時間為8~12分鐘。 塑料袋培養(yǎng)料滅菌時,應(yīng)讓其自然冷卻,當(dāng)壓力下降到0。
5千克/厘米2時,再打開排氣閥門放氣,以免在減壓過程中袋內(nèi)外產(chǎn)生壓力差,擊穿塑料袋導(dǎo)致污染雜菌。(g) 防止弄濕棉塞:滅菌前應(yīng)將試管的棉花塞用油紙或塑料薄膜包好,滅菌時三角瓶的棉塞不能接觸滅菌鍋壁,瓶子上面應(yīng)蓋鋁帽或防水油紙,以免鍋蓋內(nèi)面的水流到棉塞上。
若棉塞潮濕,可在鍋中烘烤一定時間再出鍋。b。
常壓間歇滅菌蒸汽不斷從未密閉的金屬器中散出,其內(nèi)部壓力與大氣壓相等,只能殺滅一些微生物的營養(yǎng)體,而不能殺死細菌的芽孢,所以必須配合間歇多次滅菌進行。此法適于沒有高壓滅菌設(shè)備或培養(yǎng)基中某些成分在l00°C以上髙溫下易受破壞的情況。
將培養(yǎng)基或滅菌的物品放在滅菌器中,加熱到l00°C后,持續(xù)30分鐘,此時足以殺死細菌的營養(yǎng)體但不能殺死細菌的芽孢;冷卻后取出,置室溫下或25~30°C溫箱中培養(yǎng)24小時,使芽孢萌發(fā)長成營養(yǎng)體,再放人蒸鍋中滅菌3分鐘,以殺死新萌發(fā)的營養(yǎng)體,如此連續(xù)三次,就可以將芽孢殺死。 但并非所有的芽孢都能得到萌發(fā)所需要的溫度和營養(yǎng)條件,有時還可能殘留少數(shù)未萌發(fā)的芽孢,而使滅菌不完全,這是間歇滅菌的基本缺點。
生活中常用的蒸籠,實際上就是一種蒸汽滅菌器。a常壓蒸汽滅菌法采用自然壓力。
物理方法有:干熱滅菌法(包括火焰灼燒、烘箱熱空氣滅菌)、濕熱滅菌法分常壓(包括巴氏消毒法、煮沸消毒法、間歇滅菌法)和加壓(包括常規(guī)加壓滅菌法也叫做高壓蒸汽滅菌發(fā)、連續(xù)加壓滅菌法),還有低溫抑菌(冷凍法)
化學(xué)方法:殺菌劑、消毒劑(常用,如3%~5%來蘇兒、75%乙醇)、治療劑(抗代謝藥物磺胺類、抗生素、生物藥物素)
除上述還有生物方法,其實生物藥物素也屬生物類滅菌法,比如酶抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、受體拮抗劑、抗氧化劑等
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