常見的提取分離的方法有:
1、蒸餾:
它利用混合液體或液-固體系中各組分沸點不同,使低沸點組分蒸發(fā),再冷凝以分離整個組分的單元操作過程,是蒸發(fā)和冷凝兩種單元操作的聯(lián)合。
2、重結(jié)晶:
重結(jié)晶是將晶體溶于溶劑或熔融以后,又重新從溶液或熔體中結(jié)晶的過程。重結(jié)晶可以使不純凈的物質(zhì)獲得純化,或使混合在一起的鹽類彼此分離。其中它是物理化學(xué)作用的結(jié)果。
3、萃?。?/p>
萃取是利用系統(tǒng)中組分在溶劑中有不同的溶解度來分離混合物的單元操作。
4、層析:
也叫柱色譜,是根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復(fù)分配將組分分離開來。
結(jié)構(gòu)鑒定的方法主要有:
1、紫外光譜:
分子內(nèi)部的運(yùn)動有轉(zhuǎn)動、振動和電子運(yùn)動,相應(yīng)狀態(tài)的能量(狀態(tài)的本征值)是量子化的,因此分子具有轉(zhuǎn)動能級、振動能級和電子能級。通常,分子處于低能量的基態(tài),從外界吸收能量后,能引起分子能級的躍遷。電子能級的躍遷所需能量最大,大致在1~20 eV(電子伏特)之間。
許多有機(jī)分子中的價電子躍遷,須吸收波長在200~1000 nm范圍內(nèi)的光,恰好落在紫外-可見光區(qū)域。因此,紫外吸收光譜是由于分子中價電子的躍遷而產(chǎn)生的,也可以稱它為電子光譜。
2、紅外光譜:
在有機(jī)物分子中,組成化學(xué)鍵或官能團(tuán)的原子處于不斷振動的狀態(tài),其振動頻率與紅外光的振動頻率相當(dāng)。所以,用紅外光照射有機(jī)物分子時,分子中的化學(xué)鍵或官能團(tuán)可發(fā)生振動吸收,不同的化學(xué)鍵或官能團(tuán)吸收頻率不同,在紅外光譜上將處于不同位置,從而可獲得分子中含有何種化學(xué)鍵或官能團(tuán)的信息。
3、質(zhì)譜:
質(zhì)譜分析是一種測量離子質(zhì)荷比(質(zhì)量-電荷比)的分析方法,其基本原理是使試樣中各組分在離子源中發(fā)生電離,生成不同荷質(zhì)比的帶電荷的離子,經(jīng)加速電場的作用,形成離子束,進(jìn)入質(zhì)量分析器。在質(zhì)量分析器中,再利用電場和磁場使發(fā)生相反的速度色散,將它們分別聚焦而得到質(zhì)譜圖,從而確定其質(zhì)量。
4、核磁共振:
氫原子具有磁性,如電磁波照射氫原子核,它能通過共振吸收電磁波能量,發(fā)生躍遷。用核磁共振儀可以記錄到有關(guān)信號,處在不同環(huán)境中的氫原子因產(chǎn)生共振時吸收電磁波的頻率不同,在圖譜上出現(xiàn)的位置也不同,各種氫原子的這種差異被稱為化學(xué)位移。利用化學(xué)位移,峰面積和積分值以及耦合常數(shù)等信息,進(jìn)而推測其在碳骨架上的位置。
在核磁共振氫譜圖中,特征峰的數(shù)目反映了有機(jī)分子中氫原子化學(xué)環(huán)境的種類;不同特征峰的強(qiáng)度比(及特征峰的高度比)反映了不同化學(xué)環(huán)境氫原子的數(shù)目比。
在藥物領(lǐng)域,重結(jié)晶、層析是比較常用的提取分離方法,核磁和質(zhì)譜是最常用的結(jié)構(gòu)鑒定方法。
依據(jù)生物活性物質(zhì)分子本身的理化特性,如溶解度、帶電性、大小、揮發(fā)性等進(jìn)行分離純化,植物的活性物質(zhì)的提取多采用:溶劑法、水蒸汽蒸餾法、超臨界二氧化碳提取分離法、萃取法。
分離多用硅膠柱色譜法。植物的活性物質(zhì)的提取多采用:溶劑法、水蒸汽蒸餾法、超臨界二氧化碳提取分離法、萃取法.分離多用硅膠柱色譜法.動物的生理活性物質(zhì)提取分離比較復(fù)雜,方法多種:如鹽析法、電泳法、高速離心法、受體識別法等. 動物的生理活性物質(zhì)提取分離比較復(fù)雜,方法多種:如鹽析法、電泳法、高速離心法、受體識別法等。
蛋白質(zhì)的分離純化方法:
一、根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離方法
1、蛋白質(zhì)的鹽析法:中性鹽對蛋白質(zhì)的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱鹽溶;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時,蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析。
2、等電點沉淀法:蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時顆粒之間的靜電斥力最小,因而溶解度也最小,各種蛋白質(zhì)的等電點有差別,可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點使之沉淀,但此法很少單獨使用,可與鹽析法結(jié)合用。
3、低溫有機(jī)溶劑沉淀法:用與水可混溶的有機(jī)溶劑,甲醇,乙醇或丙酮,可使多數(shù)蛋白質(zhì)溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質(zhì)較易變性,應(yīng)在低溫下進(jìn)行。
二、根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小的差別的分離方法
1、透析與超濾:透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質(zhì)分開。超濾法是利用高壓力或離心力,強(qiáng)使水和其他小的溶質(zhì)分子通過半透膜,而蛋白質(zhì)留在膜上,可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質(zhì)。
2、凝膠過濾法: 也稱分子排阻層析或分子篩層析,這是根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì)混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝膠(Sephadex ged)和瓊脂糖凝膠(agarose gel)。
三、根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)進(jìn)行分離
1、電泳法:各種蛋白質(zhì)在同一pH條件下,因分子量和電荷數(shù)量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳,這是利用一種兩性電解質(zhì)作為載體,電泳時兩性電解質(zhì)形成一個由正極到負(fù)極逐漸增加的pH梯度,當(dāng)帶一定電荷的蛋白質(zhì)在其中泳動時,到達(dá)各自等電點的pH位置就停止,此法可用于分析和制備各種蛋白質(zhì)。
2、離子交換層析法:離子交換劑有陽離子交換劑(如:羧甲基纖維素;CM-纖維素)和陰離子交換劑(二乙氨基乙基纖維素),當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時,帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上,隨后用改變pH或離子強(qiáng)度辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來。
四、根據(jù)配體特異性的分離方法-親和色譜法
親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質(zhì)的一種極為有效的方法,它經(jīng)常只需經(jīng)過一步處理即可使某種待提純的蛋白質(zhì)從很復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據(jù)某些蛋白質(zhì)與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價地結(jié)合。其基本原理:蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中是以復(fù)雜的混合物形式存在,每種類型的細(xì)胞都含有上千種不同的蛋白質(zhì),因此蛋白質(zhì)的分離(Separation),提純(Purification)和鑒定(Characterization)是生物化學(xué)中的重要的一部分,至今還沒的單獨或一套現(xiàn)成的方法能移把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合蛋白質(zhì)中提取出來,因此往往采取幾種方法聯(lián)合使用。
方法有:蒸餾 提純 分液
蒸餾是一種熱力學(xué)的分離工藝,它利用混合液體或液-固體系中各組分沸點不同,使低沸點組分蒸發(fā),再冷凝以分離整個組分的單元操作過程,是蒸發(fā)和冷凝兩種單元操作的聯(lián)合。
提純是指將混合物中的雜質(zhì)分離出來以此提高其純度。提純作為一種重要的化學(xué)方法,不僅在化學(xué)研究中具有重要作用,在化工生產(chǎn)中也同樣具有十分重要的作用。
分液是把兩種互不混溶的液體分離開的操作方法。分液使用的儀器是分液漏斗,另外,分液還需要燒杯與鐵架臺進(jìn)行輔助。分液是把兩種互不混溶的液體分離開的操作方法
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