常見的提取分離的方法有:
1、蒸餾:
它利用混合液體或液-固體系中各組分沸點不同,使低沸點組分蒸發(fā),再冷凝以分離整個組分的單元操作過程,是蒸發(fā)和冷凝兩種單元操作的聯(lián)合。
2、重結晶:
重結晶是將晶體溶于溶劑或熔融以后,又重新從溶液或熔體中結晶的過程。重結晶可以使不純凈的物質獲得純化,或使混合在一起的鹽類彼此分離。其中它是物理化學作用的結果。
3、萃取:
萃取是利用系統(tǒng)中組分在溶劑中有不同的溶解度來分離混合物的單元操作。
4、層析:
也叫柱色譜,是根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復分配將組分分離開來。
結構鑒定的方法主要有:
1、紫外光譜:
分子內(nèi)部的運動有轉動、振動和電子運動,相應狀態(tài)的能量(狀態(tài)的本征值)是量子化的,因此分子具有轉動能級、振動能級和電子能級。通常,分子處于低能量的基態(tài),從外界吸收能量后,能引起分子能級的躍遷。電子能級的躍遷所需能量最大,大致在1~20 eV(電子伏特)之間。
許多有機分子中的價電子躍遷,須吸收波長在200~1000 nm范圍內(nèi)的光,恰好落在紫外-可見光區(qū)域。因此,紫外吸收光譜是由于分子中價電子的躍遷而產(chǎn)生的,也可以稱它為電子光譜。
2、紅外光譜:
在有機物分子中,組成化學鍵或官能團的原子處于不斷振動的狀態(tài),其振動頻率與紅外光的振動頻率相當。所以,用紅外光照射有機物分子時,分子中的化學鍵或官能團可發(fā)生振動吸收,不同的化學鍵或官能團吸收頻率不同,在紅外光譜上將處于不同位置,從而可獲得分子中含有何種化學鍵或官能團的信息。
3、質譜:
質譜分析是一種測量離子質荷比(質量-電荷比)的分析方法,其基本原理是使試樣中各組分在離子源中發(fā)生電離,生成不同荷質比的帶電荷的離子,經(jīng)加速電場的作用,形成離子束,進入質量分析器。在質量分析器中,再利用電場和磁場使發(fā)生相反的速度色散,將它們分別聚焦而得到質譜圖,從而確定其質量。
4、核磁共振:
氫原子具有磁性,如電磁波照射氫原子核,它能通過共振吸收電磁波能量,發(fā)生躍遷。用核磁共振儀可以記錄到有關信號,處在不同環(huán)境中的氫原子因產(chǎn)生共振時吸收電磁波的頻率不同,在圖譜上出現(xiàn)的位置也不同,各種氫原子的這種差異被稱為化學位移。利用化學位移,峰面積和積分值以及耦合常數(shù)等信息,進而推測其在碳骨架上的位置。
在核磁共振氫譜圖中,特征峰的數(shù)目反映了有機分子中氫原子化學環(huán)境的種類;不同特征峰的強度比(及特征峰的高度比)反映了不同化學環(huán)境氫原子的數(shù)目比。
在藥物領域,重結晶、層析是比較常用的提取分離方法,核磁和質譜是最常用的結構鑒定方法。
依據(jù)生物活性物質分子本身的理化特性,如溶解度、帶電性、大小、揮發(fā)性等進行分離純化,植物的活性物質的提取多采用:溶劑法、水蒸汽蒸餾法、超臨界二氧化碳提取分離法、萃取法。
分離多用硅膠柱色譜法。植物的活性物質的提取多采用:溶劑法、水蒸汽蒸餾法、超臨界二氧化碳提取分離法、萃取法.分離多用硅膠柱色譜法.動物的生理活性物質提取分離比較復雜,方法多種:如鹽析法、電泳法、高速離心法、受體識別法等. 動物的生理活性物質提取分離比較復雜,方法多種:如鹽析法、電泳法、高速離心法、受體識別法等。
蛋白質的分離純化方法:
一、根據(jù)蛋白質溶解度不同的分離方法
1、蛋白質的鹽析法:中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質的溶解度增加,此稱鹽溶;當鹽濃度繼續(xù)升高時,蛋白質的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析。
2、等電點沉淀法:蛋白質在靜電狀態(tài)時顆粒之間的靜電斥力最小,因而溶解度也最小,各種蛋白質的等電點有差別,可利用調節(jié)溶液的pH達到某一蛋白質的等電點使之沉淀,但此法很少單獨使用,可與鹽析法結合用。
3、低溫有機溶劑沉淀法:用與水可混溶的有機溶劑,甲醇,乙醇或丙酮,可使多數(shù)蛋白質溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質較易變性,應在低溫下進行。
二、根據(jù)蛋白質分子大小的差別的分離方法
1、透析與超濾:透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質分開。超濾法是利用高壓力或離心力,強使水和其他小的溶質分子通過半透膜,而蛋白質留在膜上,可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質。
2、凝膠過濾法: 也稱分子排阻層析或分子篩層析,這是根據(jù)分子大小分離蛋白質混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝膠(Sephadex ged)和瓊脂糖凝膠(agarose gel)。
三、根據(jù)蛋白質帶電性質進行分離
1、電泳法:各種蛋白質在同一pH條件下,因分子量和電荷數(shù)量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳,這是利用一種兩性電解質作為載體,電泳時兩性電解質形成一個由正極到負極逐漸增加的pH梯度,當帶一定電荷的蛋白質在其中泳動時,到達各自等電點的pH位置就停止,此法可用于分析和制備各種蛋白質。
2、離子交換層析法:離子交換劑有陽離子交換劑(如:羧甲基纖維素;CM-纖維素)和陰離子交換劑(二乙氨基乙基纖維素),當被分離的蛋白質溶液流經(jīng)離子交換層析柱時,帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質被吸附在離子交換劑上,隨后用改變pH或離子強度辦法將吸附的蛋白質洗脫下來。
四、根據(jù)配體特異性的分離方法-親和色譜法
親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質的一種極為有效的方法,它經(jīng)常只需經(jīng)過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從很復雜的蛋白質混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據(jù)某些蛋白質與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價地結合。其基本原理:蛋白質在組織或細胞中是以復雜的混合物形式存在,每種類型的細胞都含有上千種不同的蛋白質,因此蛋白質的分離(Separation),提純(Purification)和鑒定(Characterization)是生物化學中的重要的一部分,至今還沒的單獨或一套現(xiàn)成的方法能移把任何一種蛋白質從復雜的混合蛋白質中提取出來,因此往往采取幾種方法聯(lián)合使用。
方法有:蒸餾 提純 分液
蒸餾是一種熱力學的分離工藝,它利用混合液體或液-固體系中各組分沸點不同,使低沸點組分蒸發(fā),再冷凝以分離整個組分的單元操作過程,是蒸發(fā)和冷凝兩種單元操作的聯(lián)合。
提純是指將混合物中的雜質分離出來以此提高其純度。提純作為一種重要的化學方法,不僅在化學研究中具有重要作用,在化工生產(chǎn)中也同樣具有十分重要的作用。
分液是把兩種互不混溶的液體分離開的操作方法。分液使用的儀器是分液漏斗,另外,分液還需要燒杯與鐵架臺進行輔助。分液是把兩種互不混溶的液體分離開的操作方法
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