瘤內注射方法(注射方法)

1.注射方法有哪些

注射途徑有以下幾種：①皮內注射。

用量小，常用于各種過敏試驗、預防接種及局部麻醉。②皮下注射。

常用于疫苗和菌苗的預防接種、局部麻醉及某些藥物的注射。有刺激性的藥物不宜皮下注射。

對少數(shù)心功能不全或重度脫水的病人也可采用皮下輸液。③肌肉注射。

可注射各種有刺激性的藥物。一般進針2.5~3cm。

臀大肌使用最多，從臀裂頂點向左或右一側劃一水平線，然后從髂嵴最高點上作一垂直平分線，在外上方1/4處為注射部位。注射時肌肉放松，進針、拔針迅速，推藥緩慢可減輕痛苦。

④靜脈注射。常用于急重病人，以求迅速發(fā)揮療效。

除注入藥物外，也可注入造影劑以助診斷。靜脈注射對無菌技術要求較嚴格。

⑤靜脈滴注。可用以輸入藥物、營養(yǎng)液、血液及其制劑，也可補充血容量，維持酸堿和水電平衡等。

為避免長時間輸液引起的淺靜脈栓塞，可以切或穿刺深靜脈后進行靜脈點滴，這樣可持續(xù)較長時間，避免每天穿刺。⑥動脈注射。

將某種較濃的藥液和血液快速注入動脈血管，以達到快速補充血容量，抗休克，提高冠狀動脈灌流量和抗腫瘤的目的。可注入抗腫瘤藥，使藥物迅速完全到達腫瘤。

注入透析液、吸附劑以治療腎功能衰竭、肝昏迷、高血脂癥。也可將造影劑快速注入動脈做腦血管造影、脊髓動脈造影、腎動脈造影、左心或冠狀動脈造影。

⑦心內注射。向心室腔內注入使心搏恢復的藥物。

常與心臟按摩同時應用。有胸外和胸內（開胸后應用）兩種注入法。

常用藥物有腎上腺素、普魯卡因酰胺、利多卡因、阿托品等。⑧體腔內注射。

將藥物注入各體腔內進行治療。常用的有腦室內注射、鞘內注射、胸膜腔內注射、腹腔內注射、關節(jié)腔內注射等。

2.將外源基因導入原核細胞或真核細胞分別有哪些方法

1 物理方法

1.1 DNA直接注射法： 是目的基因導入的最簡單方法， 但注入量有限， 能夠接觸到的腫瘤細胞有限，故獲得的腫瘤細胞轉化率很低， 多通過腫瘤局部多點注射給藥。

1.2 顆粒轟擊技術：將目的基因包被金屬以后，利用高壓發(fā)射裝置， 加速包裹目的基因的金屬顆粒進入細胞，從而提高腫瘤細胞的轉化率。

2 化學方法

即用化學方法構建非病毒載體系統(tǒng)，借之完成基因轉導。主要包括以下兩種。

2.1 脂質體載體：方法具有安全、簡單、低毒、無免疫原性等優(yōu)點，適用于注射方法進行器官靶向性轉移并有一定的轉移效率。是除病毒載體轉移方法之外的另一種有價值的體內基因轉移方法。多用于體外轉化細胞，或通過瘤組織內注射〔1〕進行體內轉化，并已有少數(shù)臨床應用的報告。目前常用的是陽離子脂質體（商品名為Lipofectin）。它可自發(fā)的與DNA形成復合物，保護外源DNA不被核酸酶降解，具有制備簡單、安全無毒、無免疫原性、重復性、對基因片段大小無限制且轉染操作方便等優(yōu)點。由于它可與細胞膜直接融合而能有效地避免溶酶體破壞，故遠比傳統(tǒng)的脂質體效率高。缺點是靶向性有限。Nishikawa等〔2〕從BALB/c小鼠的尾靜脈注射以熒光素酶基因為報告基因的質粒DNA-脂質體復合物， 發(fā)現(xiàn)肺、肝、脾等器官組織中都有熒光素酶基因及其產(chǎn)物，持續(xù)表達超過3個月。常規(guī)脂質體易被網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)（RES）細胞攝取，在巨噬細胞本身可成為靶細胞的部位，RES的這種親合性是有利的。Hasegawa等〔3〕采用日本血凝病毒（ hemagglutinating virus of Japan , HVJ）脂質體為載體，用HSV-tk/Gcv系統(tǒng)治療肝癌發(fā)現(xiàn)，在體外試驗中當Gcv的濃度100microg/ml時幾乎所有腫瘤均被殺死，甚至當轉導率只有20%時，也有1/3腫瘤被消滅。此方法重復應用效果更佳，且皮下注射未見明顯的炎癥反應。

2.2 受體介導法：利用肝細胞上富含轉移因子和糖蛋白受體的特點，人工合成多聚陽離子氨基酸，進而連接轉移因子（或糖蛋白）和目的基因構成復合物，通過與肝細胞表面的受體結合來實現(xiàn)目的基因的轉移。此法靶向性好，但受體介導的內吞小泡會被轉運到溶酶體，易被溶酶體降解而造成目的基因表達時間短暫，表達效率低下。利用氯哇抑制溶酶體酶或腺病毒與內吞小泡相融合而將其破壞釋放出外源DNA，可提高轉化效率。

3 生物學方法

主要通過構建病毒載體來完成。

3.1 逆轉錄病毒（retrovirus,Rv）：構建簡單，裝載外源基因容量最大達8kb，整合入宿主細胞基因組而無病毒蛋白表達。但僅能感染分裂期細胞，體外制備滴度較低，且其隨機整合有引起“插入性突變”的可能〔4〕。

3.2 腺病毒（adenovirus, Adv）： 為近年肝細胞肝癌基因治療中報告最多的一種病毒載體〔5〕。體外制備滴度較大 ，裝載外源基因容量最大達35kb，不整合入宿主細胞基因組因而避免插入突變的危險，能感染分裂細胞和非分裂細胞。但易引起宿主免疫反應而使轉染效率下降，且大劑量靜脈給予可導致嚴重的肝臟炎癥反應，因此通過全身給藥受到限制。Nagao等〔6〕發(fā)現(xiàn)瘤內注射重組Adv后，目的基因可有效表達，但表達時間短暫，重復注射后表達效率降低且誘發(fā)體液和細胞免疫反應。

3.3 單純皰疹病毒：單純皰疹病毒（herps simplex virus,HSV）對非分裂細胞有天然的親合力，裝載外源基因容量達30kb，體外制備滴度接近腺病毒。但構建時難以除去與裂解細胞有關的基因而對細胞毒性大〔7〕。

3.4 腺相關病毒：腺相關病毒（adeno-associated virus,AAV）在人類不引起任何病理性后果，它能感染非分裂S相細胞，還能將基因轉人非周期（noncyling）腫瘤細胞。AAV是一種缺陷前病毒，對人類無致病性。能用于運載外源性重組基因組，已應用于肝和肝癌細胞的治療基因轉移〔8〕。

3.5 其他病毒：痘苗病毒〔9〕（vaccini virus）可以獨立在細胞之中復制和轉錄，并能以較強的方式表達多個腫瘤抗原。桿狀病毒〔10〕（bacul virus）能夠感染肝細胞和肝腫瘤細胞，并能增強肝細胞腫瘤壞死因子a(TNFa)、IL-1a、IL-lβ的表達。