細(xì)菌學(xué)的檢驗(yàn)方法有: 1.涂片鏡檢 將病料涂于清潔無油污的載玻片上,干燥后在酒精燈火焰上固 定,選用單染色法(如美藍(lán)染色法)、革蘭氏染色法、抗酸染色法或其他特殊染色法染色鏡檢,根據(jù)所觀察到的細(xì) 菌形態(tài)特征,作出初步診斷或確定進(jìn)一步檢驗(yàn)的步驟。
2.分離培養(yǎng) 根據(jù)所懷疑傳染病病原菌的特點(diǎn),將病料接種于適宜的細(xì)菌培 養(yǎng)基上,在一定溫度(常為37°C)下進(jìn)行培養(yǎng),獲得純 培養(yǎng)苗后,再用特殊的培養(yǎng)基培養(yǎng),進(jìn)行細(xì)菌的形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)特 征、生化特性、致病力和抗原特性鑒定。 3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 用滅菌生理鹽水將病料做成1 : 10懸液,或利用分離培養(yǎng)獲得的細(xì)菌液感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,如小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔等。
感染方法可用皮下、肌內(nèi)、腹腔、靜脈或腦內(nèi)注射。感染后按常規(guī)隔離 伺養(yǎng)管理,注意觀察,有時(shí)還需對(duì)某種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物測量體溫;如有死亡,應(yīng)立即進(jìn)行剖檢及細(xì)菌學(xué)檢查。
1.涂片鏡檢
將病料涂于清潔無油污的載玻片上,干燥后在酒精燈火焰上固 定,選用單染色法(如美藍(lán)染色法)、革蘭氏染色法、抗酸染色法或其他特殊染色法染色鏡檢,根據(jù)所觀察到的細(xì) 菌形態(tài)特征,作出初步診斷或確定進(jìn)一步檢驗(yàn)的步驟。
2.分離培養(yǎng)
根據(jù)所懷疑傳染病病原菌的特點(diǎn),將病料接種于適宜的細(xì)菌培 養(yǎng)基上,在一定溫度(常為37°C)下進(jìn)行培養(yǎng),獲得純 培養(yǎng)苗后,再用特殊的培養(yǎng)基培養(yǎng),進(jìn)行細(xì)菌的形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)特 征、生化特性、致病力和抗原特性鑒定。
3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
用滅菌生理鹽水將病料做成1 : 10懸液,或利用分離培養(yǎng)獲得的細(xì)菌液感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,如小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔等。感染方法可用皮下、肌內(nèi)、腹腔、靜脈或腦內(nèi)注射。感染后按常規(guī)隔離 伺養(yǎng)管理,注意觀察,有時(shí)還需對(duì)某種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物測量體溫;如有死亡,應(yīng)立即進(jìn)行剖檢及細(xì)菌學(xué)檢查。
一 淀粉水解試驗(yàn) (一)實(shí)驗(yàn)原理 細(xì)菌對(duì)大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用,必須靠產(chǎn)生的胞外酶,如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質(zhì)分解。
胞外酶能分泌擴(kuò)散到細(xì)胞外,將物質(zhì)分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸。這些小單位的物質(zhì)能被細(xì)菌吸收和利用。
水解過程可通過底物的變化來證明,如細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域,用碘測定不再產(chǎn)生藍(lán)色;水解明膠可觀察到明膠被液化;脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸改變培養(yǎng)基的pH,其中的中性紅指示劑使培養(yǎng)基從淡紅色變?yōu)樯罴t色。(二)實(shí)驗(yàn)方法 將淀粉培養(yǎng)基溶化后,冷至45℃左右,以無菌操作制成平板。
取18-24h的純培養(yǎng)物點(diǎn)于平板上,每皿可點(diǎn)種3-5個(gè)菌株,適溫培養(yǎng)2-4d,形成菌落后,在平板上滴加盧戈氏碘液,以鋪滿菌落周圍為度,平板成藍(lán)色。如果菌落周圍有無色透明圈出現(xiàn),說明淀粉已經(jīng)被水解,實(shí)驗(yàn)為陽性,否則為陰性。
透明圈的大小一般說明水解淀粉的能力。(三)實(shí)驗(yàn)試劑的配制 肉湯蛋白胨瓊脂成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL,pH7.2。
淀粉培養(yǎng)基制法:在肉湯蛋白胨瓊脂中添加0.2%的可溶性淀粉,校正pH值至7.6,分裝三角瓶,121℃ 20min滅菌備用。盧戈氏(Lugol)碘液:碘片1g,碘化鉀2g,蒸餾水300ml,先將碘化鉀溶解在少量水中,再將碘片溶解在碘化鉀溶液中,混勻,定容。
二 糖發(fā)酵試驗(yàn)(一)實(shí)驗(yàn)原理 單糖發(fā)酵是將葡萄糖,乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi),使其最終濃度為0.75-1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管,制成單糖發(fā)酵管,接種細(xì)菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18-24小時(shí),若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃,若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成,小倒管內(nèi)則聚集有氣泡;不分解,則指示劑不變色。
(二)實(shí)驗(yàn)材料 1.菌種:大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。 2.培養(yǎng)基:葡萄糖發(fā)酵管,乳糖發(fā)酵管等。
(三)實(shí)驗(yàn)方法1.將傷寒桿菌,大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內(nèi)。 2.置37℃孵箱培養(yǎng)18-24小時(shí)。
3.觀察結(jié)果:由于一些細(xì)菌能分解某種糖類產(chǎn)酸,所以培養(yǎng)基中pH下降到7.0以下,在酚紅指示劑的顯示下,培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“+”表示,如果同時(shí)產(chǎn)生氣體,則培養(yǎng)基中小倒管內(nèi)有氣泡出現(xiàn),此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣,以“⊕”表示,不分解,則指示劑不變色,用“-”表示。
(四)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 傷寒桿菌 大腸桿菌 葡萄糖 + ⊕ 乳 糖 - ⊕ (五)實(shí)驗(yàn)試劑的配制1.單糖發(fā)酵管的制備: 成分:蛋白胨水培養(yǎng)基 100ml ,0.2%酚紅 1ml ,所需糖(葡萄糖或乳糖)0.75-1g 制法: (1)將上述成分溶化,混勻分裝于內(nèi)含有倒置小玻璃管的小試管中,每管約2ml,加塞。 (2)小倒管排氣,滅菌(8-10磅,20-30分鐘),貯存?zhèn)溆谩?/p>
用途:供單糖發(fā)酵試驗(yàn)用。 2.0.2%酚紅配制法 酚紅(phenol red)0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ,蒸餾水 92ml 將酚紅入研缽徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨,再補(bǔ)足蒸餾水即成。
若需長時(shí)間保存,可高壓滅菌后貯存?zhèn)溆谩?三 甲基紅(M.R)試驗(yàn)(一)實(shí)驗(yàn)原理 某些細(xì)菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等,使培養(yǎng)基pH值降至4.5以下,加入甲基紅指示劑呈紅色,此為陽性反應(yīng);若產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為醇、醛、氣體和水等,則培養(yǎng)基的酸堿度仍在pH 6.2以上,加入甲基紅指示劑呈現(xiàn)黃色,為陰性反應(yīng)。
(二)實(shí)驗(yàn)材料1. 菌種:大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌18-24h瓊脂斜面培養(yǎng)物。 2. 培養(yǎng)基:葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。
3. 試劑:甲基紅試劑。 (三)實(shí)驗(yàn)方法1. 分別將大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。
2. 置37℃培養(yǎng)2-3天取出,分別滴加甲基紅試劑2-3滴,混勻,觀察結(jié)果。 (四)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 大腸桿菌:+,產(chǎn)氣桿菌:-。
(五)實(shí)驗(yàn)試劑的配制1.甲基紅試劑的配制 甲基紅 0.04g, 95%酒精 60ml , 蒸餾水 40ml 。先使甲基紅溶解于酒精中,再加入蒸餾水,混合,搖勻即成。
2.葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物 成分:蛋白胨5g 葡萄糖5g 制法: (1)將上述成分溶解于蒸餾水中。 (2)調(diào)節(jié)pH至7.6,用濾紙過濾除渣。
(3)分裝中試管,每管約3-4ml,滅菌后備用。 用途:供甲基紅及V-P試驗(yàn)用。
四 產(chǎn)吲哚(indole)試驗(yàn)(一)實(shí)驗(yàn)原理 某些細(xì)菌如大腸桿菌,變形桿菌等具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水培養(yǎng)基中的色氨酸,產(chǎn)生靛基質(zhì)(無色吲哚),再與歐立希試劑(對(duì)二甲基氨基苯甲醛)反應(yīng),形成紅色化合物—玫瑰吲哚,即為陽性反應(yīng)。 (二)實(shí)驗(yàn)材料1. 菌種:大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。
2. 培養(yǎng)基:蛋白胨水培養(yǎng)基。 3. 試劑,歐立希(Ehrlich)試劑(對(duì)二甲基氨基苯甲醛) (三)實(shí)驗(yàn)方法1. 分別將大腸桿菌,傷寒桿菌接種于兩支蛋白胨水培養(yǎng)基中。
2. 置37℃培養(yǎng)2-3天后,每管沿管壁各加歐立希試劑0.5-1ml于培養(yǎng)液面上,待1-2分鐘后觀察結(jié)果:在交界面出現(xiàn)玫瑰紅色環(huán)即為吲哚試驗(yàn)陽性,無紅色環(huán)即為陰性。 (四)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 大腸桿菌:+ ;傷寒桿菌:- 。
(五)實(shí)驗(yàn)試劑的配制1.蛋白胨水培養(yǎng)基的制備 成分:蛋白胨10g 氯化鈉5g 蒸餾水1000ml 制法: (1)先用少量蒸餾水將蛋白胨和氯化鈉相混合溶解,再加足蒸餾水量。 。
細(xì)菌 [what]什么是細(xì)菌?細(xì)菌(英文:germs;bacteria)隸屬生物學(xué)一類,是在自然界分布最廣、個(gè)體數(shù)量最多的有機(jī)體,是大自然物質(zhì)循環(huán)的主要參與者。
細(xì)菌主要由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)體等部分構(gòu)成,有的細(xì)菌還有夾膜、鞭毛、菌毛等特殊結(jié)構(gòu)。絕大多數(shù)細(xì)菌的直徑大小在0.5~5μm之間。
可根據(jù)形狀分為三類,即:球菌、桿菌和螺旋菌(包括弧形菌)。 還有一種利用細(xì)菌的生活方式來分類,即可分為兩大類:腐生生活與寄生生活。
(一)細(xì)胞壁 細(xì)胞壁厚度因細(xì)菌不同而異,一般為15-30nm。主要成分是肽聚糖,由n-乙酰葡糖胺和n-乙酰胞壁酸構(gòu)成雙糖單元,以β(1-4)糖苷鍵連接成大分子。
n-乙酰胞壁酸分子上有四肽側(cè)鏈,相鄰聚糖纖維之間的短肽通過肽橋(革蘭氏陽性菌)或肽鍵(革蘭氏陰性菌)橋接起來,形成了肽聚糖片層,像膠合板一樣,粘合成多層。 肽聚糖中的多糖鏈在各物種中都一樣,而橫向短肽鏈卻有種間差異。
革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁厚約20~80nm,有15-50層肽聚糖片層,每層厚1nm,含20-40%的磷壁酸(teichoic acid),有的還具有少量蛋白質(zhì)。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁厚約10nm,僅2-3層肽聚糖,其他成分較為復(fù)雜,由外向內(nèi)依次為脂多糖、細(xì)菌外膜和脂蛋白。
此外,外膜與細(xì)胞之間還有間隙。 肽聚糖是革蘭陽性菌細(xì)胞壁的主要成分,凡能破壞肽聚糖結(jié)構(gòu)或抑制其合成的物質(zhì),都有抑菌或殺菌作用。
如溶菌酶是n-乙酰胞壁酸酶,青霉素抑制轉(zhuǎn)肽酶的活性,抑制肽橋形成。 細(xì)菌細(xì)胞壁的功能包括:保持細(xì)胞外形;抑制機(jī)械和滲透損傷(革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁能耐受20kg/cm2的壓力);介導(dǎo)細(xì)胞間相互作用(侵入宿主);防止大分子入侵;協(xié)助細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和分裂。
脫壁的細(xì)胞稱為細(xì)菌原生質(zhì)體(bacterial protoplast)或球狀體(spheroplast,因脫壁不完全),脫壁后的細(xì)菌原生質(zhì)體,生存和活動(dòng)能力大大降低。 (二)細(xì)胞膜 是典型的單位膜結(jié)構(gòu),厚約8~10nm,外側(cè)緊貼細(xì)胞壁,某些革蘭氏陰性菌還具有細(xì)胞外膜。
通常不形成內(nèi)膜系統(tǒng),除核糖體外,沒有其它類似真核細(xì)胞的細(xì)胞器,呼吸和光合作用的電子傳遞鏈位于細(xì)胞膜上。某些行光合作用的原核生物(藍(lán)細(xì)菌和紫細(xì)菌),質(zhì)膜內(nèi)褶形成結(jié)合有色素的內(nèi)膜,與捕光反應(yīng)有關(guān)。
某些革蘭氏陽性細(xì)菌質(zhì)膜內(nèi)褶形成小管狀結(jié)構(gòu),稱為中膜體(mesosome)或間體(圖3-11),中膜體擴(kuò)大了細(xì)胞膜的表面積,提高了代謝效率,有擬線粒體(chondroid)之稱,此外還可能與dna的復(fù)制有關(guān)。 (三)細(xì)胞質(zhì)與核質(zhì)體 細(xì)菌和其它原核生物一樣,沒有核膜,dna集中在細(xì)胞質(zhì)中的低電子密度區(qū),稱核區(qū)或核質(zhì)體(nuclear body)。
細(xì)菌一般具有1-4個(gè)核質(zhì)體,多的可達(dá)20余個(gè)。核質(zhì)體是環(huán)狀的雙鏈dna分子,所含的遺傳信息量可編碼2000~3000種蛋白質(zhì),空間構(gòu)建十分精簡,沒有內(nèi)含子。
由于沒有核膜,因此dna的復(fù)制、rna的轉(zhuǎn)錄與蛋白的質(zhì)合成可同時(shí)進(jìn)行,而不像真核細(xì)胞那樣這些生化反應(yīng)在時(shí)間和空間上是嚴(yán)格分隔開來的。 每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞約含5000~50000個(gè)核糖體,部分附著在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),大部分游離于細(xì)胞質(zhì)中。
細(xì)菌核糖體的沉降系數(shù)為70s,由大亞單位(50s)與小亞單位(30s)組成,大亞單位含有23srrna,5srrna與30多種蛋白質(zhì),小亞單位含有16srrna與20多種蛋白質(zhì)。30s的小亞單位對(duì)四環(huán)素與鏈霉素很敏感,50s的大亞單位對(duì)紅霉素與氯霉素很敏感。
細(xì)菌核區(qū)dna以外的,可進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳因子,稱為質(zhì)粒(plasmid)。質(zhì)粒是裸露的環(huán)狀雙鏈dna分子,所含遺傳信息量為2~200個(gè)基因,能進(jìn)行自我復(fù)制,有時(shí)能整合到核dna中去。
質(zhì)粒dna在遺傳工程研究中很重要,常用作基因重組與基因轉(zhuǎn)移的載體。 胞質(zhì)顆粒是細(xì)胞質(zhì)中的顆粒,起暫時(shí)貯存營養(yǎng)物質(zhì)的作用,包括多糖、脂類、多磷酸鹽等。
(四)其他結(jié)構(gòu) 許多細(xì)菌的最外表還覆蓋著一層多糖類物質(zhì),邊界明顯的稱為莢膜(capsule),如肺炎球菌,邊界不明顯的稱為粘液層(slime layer),如葡萄球菌。莢膜對(duì)細(xì)菌的生存具有重要意義,細(xì)菌不僅可利用莢膜抵御不良環(huán)境;保護(hù)自身不受白細(xì)胞吞噬;而且能有選擇地粘附到特定細(xì)胞的表面上,表現(xiàn)出對(duì)靶細(xì)胞的專一攻擊能力。
例如,傷寒沙門桿菌能專一性地侵犯腸道淋巴組織。細(xì)菌莢膜的纖絲還能把細(xì)菌分泌的消化酶貯存起來,以備攻擊靶細(xì)胞之用。
鞭毛是某些細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官,由一種稱為鞭毛蛋白(flagellin)的彈性蛋白構(gòu)成,結(jié)構(gòu)上不同于真核生物的鞭毛。細(xì)菌可以通過調(diào)整鞭毛旋轉(zhuǎn)的方向(順和逆時(shí)針)來改變運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。
菌毛是菌體表面極其的蛋白纖細(xì),須用電鏡觀察。特點(diǎn)是:細(xì)、短、直、硬、多,菌毛與細(xì)菌運(yùn)動(dòng)無關(guān),根據(jù)形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能,可分為普通菌毛和性菌毛兩類。
前者與細(xì)菌吸附和侵染宿主有關(guān),后者為中空管子,與傳遞遺傳物質(zhì)有關(guān)。 (五)繁殖 細(xì)菌一二分裂的方式繁殖,某些細(xì)菌處于不利的環(huán)境,或耗盡營養(yǎng)時(shí),形成內(nèi)生孢子,又稱芽孢,是對(duì)不良環(huán)境有強(qiáng)抵抗力的休眠體,由于芽胞在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成,故常稱為內(nèi)生孢子。
芽孢的生命力非常頑強(qiáng),有些湖底沉積土中的芽抱桿茵經(jīng)500-1000年后仍有活力,肉毒梭菌的芽孢在ph 7.0時(shí)能耐受100℃煮沸5-9.5小。
原發(fā)布者:龍?jiān)雌诳W(wǎng)
目前有哪種微生物測試方法能夠在6~8個(gè)小時(shí)內(nèi)顯示食品和食品生產(chǎn)環(huán)境清潔度的微生物水平?食品和飲料生產(chǎn)公司的答案是令人失望的:沒有!細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群以及大腸桿菌平板計(jì)數(shù)通常可以對(duì)食品樣品以及表面處理環(huán)境的微生物水平進(jìn)行評(píng)估,然而檢測結(jié)果需要在24~72小時(shí)之后獲得。而采用顯色培養(yǎng)基進(jìn)行的特殊細(xì)菌測試,獲得檢測結(jié)果的時(shí)間會(huì)更長,如果采用外部實(shí)驗(yàn)室的方法,那么從樣品收集到獲得檢測結(jié)果要在3~5天。盡管快速自動(dòng)的檢測系統(tǒng)是可行的,但是這些檢測方法也需要一天以上的時(shí)間,且對(duì)于大多數(shù)的公司來講檢測費(fèi)用較為昂貴,檢測方法也較為復(fù)雜。相比之下,食品公司一般會(huì)采用外部實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物檢測。受方法的科學(xué)局限、靈敏度的約束、分析的復(fù)雜程度以及高昂費(fèi)用等因素的影響,盡管面對(duì)需要盡快獲得產(chǎn)品檢測結(jié)果的情況,但大多數(shù)的食品飲料生產(chǎn)經(jīng)營者也不得不采用延遲獲得檢測結(jié)果的技術(shù)對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測。目前研發(fā)出一種被AOAC(美國分析化學(xué)家協(xié)會(huì))認(rèn)證的,操作十分簡單,能夠在當(dāng)天獲得產(chǎn)品指示微生物如大腸菌群、大腸桿菌以及總需氧微生物的檢測結(jié)果的新的檢測平臺(tái),這種新型的檢測平臺(tái)被稱為
細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查方法:常用染色方法
1.美藍(lán)染色法
在已干燥、固定好的抹片上,滴加適量的美藍(lán)染色液,經(jīng)1一2分鐘,水洗,干后鏡檢,結(jié)果是細(xì)菌呈藍(lán)色。
2.稀釋石炭酸復(fù)紅染色法
染色方法同美藍(lán)染色法,結(jié)果是細(xì)菌呈紅色。
3.革蘭(Gram)氏染色法
(1)在已干燥、固定好的抹片上,滴加草酸按結(jié)晶紫染色液,染色2一3分鐘,水洗。
(2)加革蘭氏碘液于抹片上媒染1一2分鐘,水洗。
(3)加95%酒精于抹片上脫色,約30秒至1分鐘,水洗。
(4)加稀釋石炭酸復(fù)紅(或沙黃水溶液)復(fù)染50一60秒鐘,水洗。干后鏡檢。結(jié)果是細(xì)菌染成藍(lán)紫色的稱為革蘭氏陽性細(xì)菌,染成紅色的稱為革蘭氏陰性細(xì)菌。
大便是由人體消化后形成的廢物,是由食物經(jīng)過食道、胃、小腸、大腸后產(chǎn)生的代謝廢物。一般而言,大便的顏色、性狀對(duì)疾病的診斷很有幫助,而顯微鏡檢查則對(duì)確定疾病的性質(zhì)較為重要。由于人體的消化系統(tǒng)的復(fù)雜以及寶寶消化道的相對(duì)脆弱,所以,化驗(yàn)大便可以知道消化管道上某一部份的,甚至某特定部份的機(jī)能上或器質(zhì)上的病變,作為判斷寶寶的消化道疾病重要手段。
注意事項(xiàng)是用竹簽或木片采取約蠶豆大一塊新鮮糞便,裝入專門留取標(biāo)本的紙盒內(nèi),寫上姓名,立即送檢;如大便有膿血時(shí),應(yīng)留取膿血部分;水樣便要用容器留送;檢查寄生蟲時(shí)要在糞便各部分都留一點(diǎn)。
正常人的糞便為黃褐色成形軟便.嬰兒糞便多呈淡黃或者黃色。正常嬰幼兒多為稀糊狀,無紅細(xì)胞和膿細(xì)胞。
便常規(guī)的細(xì)菌學(xué)檢查:腸道致病菌檢查,主要是靠培養(yǎng)分離與鑒定,但有時(shí)也可以直接涂片、鏡檢。
霍亂弧菌:用懸滴法可觀察其特有形態(tài)與運(yùn)動(dòng)方式。
偽膜性腸炎:涂片、染色后查找葡萄球菌、念珠菌或梭形菌。
腸結(jié)核:涂片、耐酸染色查找結(jié)核分枝桿菌。
念珠菌性腸炎:涂片、鏡檢可找到酵母樣芽生孢子和假菌絲。
某些腹瀉患者:涂片可見大量八疊球菌及人體酵母菌,后者在形態(tài)上易與白細(xì)胞或原蟲包囊混淆,可用蒸餾水代替生理鹽水作糞便涂片,此時(shí)人體酵母功很快破裂消失,而白細(xì)胞或原蟲包囊則不易破壞。
尿細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)診斷尿路感染具有重要價(jià)值。
主要有以下兩種 方法。 (1)尿涂片找細(xì)菌。
尿路細(xì)菌感染時(shí)尿中含有大量細(xì)菌,尿液 涂片鏡檢易找到細(xì)菌。每高倍視野細(xì)菌數(shù)少于10個(gè)或未找到,提示 中段尿培養(yǎng)陰性或菌落數(shù)低于10 V ml。
如果細(xì)菌數(shù)為15?30個(gè)/高 倍視野,中段尿培養(yǎng)菌落數(shù)常大于105/ml。 據(jù)中山醫(yī)科大學(xué)葉任高 教授經(jīng)驗(yàn),其可靠率為90%以上。
并認(rèn)為,即使已開始使用抗生素的病例,尿培養(yǎng)陰性,尿沉渣革蘭染色找細(xì)菌仍有可能找到,這樣 就可彌補(bǔ)在應(yīng)用抗生素的情況下尿細(xì)菌培養(yǎng)陰性的缺點(diǎn)。另外,應(yīng) 用革蘭染色涂片找細(xì)菌可以初步確定尿路感染是陽性球菌或陰性桿 菌,作為使用抗菌藥物的參考。
(2)尿液細(xì)菌培養(yǎng)。正常人尿內(nèi)有一定數(shù)量的細(xì)菌,尿道口周 圍亦有大量細(xì)菌。
正常人尿道口及陰道存在以下細(xì)菌:表皮葡萄球菌、鏈球菌、枯草桿菌、假白喉棒狀桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、乳酸桿菌、卡他布蘭漢氏菌及恥垢分枝桿菌等。外陰沖洗不凈,細(xì)菌常混人尿中, 但細(xì)菌數(shù)小于103/ml。
尿細(xì)菌培養(yǎng)的目的主要是運(yùn)用中段尿培養(yǎng)菌 落計(jì)數(shù)的方法以鑒別是否為尿路感染。 若尿菌落數(shù)大于10 V ml為感染,準(zhǔn)確率約80%;細(xì)菌數(shù)小于 103/ml或有多種細(xì)菌生長,為污染所致,無臨床意義。
但值得注 意的是球菌,特別是糞球菌及腸球菌繁殖緩慢,其尿菌落數(shù)若為 103 ~ 104/ml之間,即有診斷價(jià)值;細(xì)菌數(shù)在103 ~105/ml者不能排 除感染,考慮是否因應(yīng)用抗生素、清洗消毒劑混入、尿過頻、細(xì)菌 生長緩慢等因素所致,必要時(shí)復(fù)查。 不論中段尿,還是導(dǎo)尿,都不可避免前尿道細(xì)菌的污染。
因此, 做細(xì)菌培養(yǎng)而不加含菌量計(jì)數(shù),結(jié)果很不可靠。但在常規(guī)消毒下做 膀胱穿刺取尿作定性卻很可靠,只要培養(yǎng)出細(xì)菌,不論細(xì)菌數(shù)多少,均認(rèn)為是感染,不會(huì)出現(xiàn)假陽性。
尿細(xì)菌定量培養(yǎng)結(jié)果很可靠,但 遇到下列情況時(shí)需做膀胱穿刺尿培養(yǎng):沒有條件做尿含菌量計(jì)數(shù)的 單位,在診斷上有閑難時(shí);高度懷疑有尿路感染而尿含菌量卻低; 反復(fù)尿定量細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果均可疑者;要進(jìn)一步確定是否有混合感染 存在;可疑的厭氧菌所致者。 以上情況均考慮做膀胱穿刺尿培養(yǎng)。
方法如下:鼓勵(lì)患者飲水,使膀胱充盈至恥骨聯(lián)合以上,捫及膀胱 后即可穿刺。先剎毛、消毒,用9號(hào)10 cm長的針頭連接注射器,在 恥骨聯(lián)合上方正中線穿入皮膚,然后猛力穿入膀胱,將尿液收集于 無菌試管送檢。
拔針后用無菌紗布覆蓋。 本法是避免污染的最好方法。
缺點(diǎn)是患者有一定的痛苦。 急性泌尿系感染多為單種細(xì)菌,大腸桿菌占60% ~ 80%,余為 金黃色葡萄球菌、變形桿菌、糞腸球菌;慢性感染常混合其他細(xì)菌; 綠膿桿菌多在手術(shù)或插管后引起感染。
衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查
大腸桿菌不斷隨糞便排出體外,污染周圍環(huán)境和水源、食品等。取樣檢查時(shí),樣品中大腸桿菌越多,表示樣品被糞便污染越嚴(yán)重,也表明樣品中存在腸道致病菌的可能性越大。故應(yīng)對(duì)飲水、食品、飲料進(jìn)行衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查。
細(xì)菌總數(shù):檢測每毫升或每克樣品中所含細(xì)菌數(shù),采用傾注培養(yǎng)計(jì)算。我國規(guī)定的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是每毫升飲水中細(xì)菌總數(shù)不得超過100個(gè)。
大腸菌數(shù)指數(shù):指每立升中大腸菌群數(shù),采用乳糖發(fā)酵法檢測。我國的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是每1000ml飲水中不得超過3個(gè)大腸菌群;瓶裝汽水、果汁等每100ml大腸菌群不得超過5個(gè)。
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