免疫學(xué)檢測方法可分為體液免疫和細(xì)胞免疫。
體液免疫:
所謂體液免疫,即以B細(xì)胞產(chǎn)生抗體來達(dá)到保護(hù)目的的免疫機(jī)制。負(fù)責(zé)體液免疫的細(xì)胞是B細(xì)胞。體液免疫的抗原多為相對分子質(zhì)量在10,000以上的蛋白質(zhì)和多糖大分子,病毒顆粒和細(xì)菌表面都帶有不同的抗原,所以都能引起體液免疫。
臨床上一個反復(fù)發(fā)作的化膿感染,常使醫(yī)生想到患者是否有免疫缺陷病,一般原發(fā)免疫缺陷發(fā)病年齡很小,而繼發(fā)免疫缺陷病人多在30歲以上。絕大多數(shù)免疫缺陷病人多表現(xiàn)為體液和細(xì)胞免疫同時受損,所以應(yīng)全面檢查這兩方面的功能。遺憾的是,目前應(yīng)用的檢測方法的局限性,其結(jié)果常難以得出明確結(jié)論。
細(xì)胞免疫:
T細(xì)胞受到抗原刺激后,增殖、分化、轉(zhuǎn)化為致敏T細(xì)胞(也叫效應(yīng)T細(xì)胞),當(dāng)相同抗原再次進(jìn)入機(jī)體的細(xì)胞中時,致敏T細(xì)胞(效應(yīng)T細(xì)胞)對抗原的直接殺傷作用及致敏T細(xì)胞所釋放的細(xì)胞因子的協(xié)同殺傷作用,統(tǒng)稱為細(xì)胞免疫。
在抗感染免疫中,細(xì)胞免疫主要參與對胞內(nèi)寄生的病原微生物的免疫應(yīng)答及對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答,參與遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和自身免疫病的形成,參與移植排斥反應(yīng)及對體液免疫的調(diào)節(jié)。也可以說,在抗感染免疫中,細(xì)胞免疫既是抗感染免疫的主要力量,參與免疫防護(hù);又是導(dǎo)致免疫病理的重要因素。
以下是幾種常用的免疫學(xué)技術(shù):1.免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)是利用熒光素標(biāo)記的抗體(或抗原)檢測組織、細(xì)胞或血清 中的相應(yīng)抗原(或抗體)的方法.由于熒光抗體具有安全、靈敏的特點(diǎn),因此已 廣泛應(yīng)用在免疫熒光檢測和流式細(xì)胞計數(shù)領(lǐng)域.根據(jù)熒光素標(biāo)記的方式不同,可 分為直標(biāo)熒光抗體和間標(biāo)熒光抗體.間標(biāo)熒光抗體中一抗并不直接連接熒光素,而是先將一抗結(jié)合到蛋白,然后帶有熒光素的二抗再結(jié)合至一抗.通過二抗的結(jié) 合,能將信號進(jìn)行放大,因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度,但是隨之帶來 的高背景也降低了檢測的特異性.近年來,隨著熒光素和熒光檢測技術(shù)的不斷進(jìn) 步,熒光檢測的靈敏度已經(jīng)接近同位素檢測的水平,直接標(biāo)記的熒光抗體逐漸取 代間接標(biāo)記抗體.這些標(biāo)記了熒光素的抗體直接結(jié)合至抗原,大大提高了檢測的 特異性,使檢測的結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠.熒光檢測技術(shù)的發(fā)展,使得免疫熒光技術(shù) 在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細(xì)菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查IgM 抗體,做為近期接觸抗原的標(biāo)志.利用單克隆熒光直接標(biāo)記抗體鑒定淋巴細(xì)胞的 亞類.通過流式細(xì)胞儀,針對細(xì)胞表面不同抗原,可以同時使用多種不同的熒光 抗體,對同一細(xì)胞進(jìn)行多標(biāo)記染色.2.放射免疫檢測 放射免疫檢測技術(shù)是目前靈敏度最高的檢測技術(shù),利用放射性同素標(biāo)記抗 原(或抗體),與相應(yīng)抗體(或抗原)結(jié)合后,通過測定抗原抗體結(jié)合物的放射 性檢測結(jié)果.放射性同位素具有pg 級的靈敏度,且利用反復(fù)曝光的方法可對痕 量物質(zhì)進(jìn)行定量檢測.但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用.3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 酶聯(lián)免疫檢測是目前應(yīng)用最廣泛的免疫檢測方法.該方法是將二抗標(biāo)記上 酶,抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化底物的作用結(jié)合起來,根據(jù)酶作用底物后的 顯色顏色變化來判斷試驗(yàn)結(jié)果,其敏感度可達(dá)ng 水平.常見用于標(biāo)記的酶有辣 根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)等.由于酶聯(lián)免疫法無需特殊的儀器,檢測簡單,因此被廣泛應(yīng)用于疾病檢測.常用的方法有間接法、夾心法以及BAS -ELISA.間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內(nèi),然后依次加入一抗、標(biāo)記了 酶的二抗和底物顯色,通過儀器(例如酶標(biāo)儀)定量檢測抗原.這種方法操作簡 單但由于高背景而特異性較差.目前已逐漸被夾心法取代.夾心法利用二種一抗 對目標(biāo)抗原進(jìn)行捕獲和固定,在確保靈敏度的同時大大提高了反應(yīng)的特異性.近 年來,抗原的定量檢測技術(shù)也不斷推陳出新.近年來,在夾心法ELISA 的基礎(chǔ)上,開發(fā)了多抗原檢測試劑盒,能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量.這項技術(shù) 的應(yīng)用大大縮短了診斷的時間,提高診斷的可靠性和及時性.4.免疫金膠體技術(shù) 膠體金技術(shù)經(jīng)過30 多年的發(fā)展到現(xiàn)在已日趨成熟,該方法是將二抗標(biāo)記上 膠體金顆粒,利用抗原抗體間的特異性反應(yīng),最終將膠體金標(biāo)記的二抗吸附于滲 濾膜上,此方法簡單,快速,廣泛應(yīng)用于臨床篩查.。
研究方法,一般包括文獻(xiàn)調(diào)查法、觀察法、文獻(xiàn)研究法、跨學(xué)科研究法、個案研究法等等。
1、調(diào)查法
調(diào)查法是科學(xué)研究中最常用的方法之一。調(diào)查法中最常用的是問卷調(diào)查法,它是以書面提出問題的方式搜集資料的一種研究方法,即調(diào)查者就調(diào)查項目編制成表式,分發(fā)或郵寄給有關(guān)人員,請示填寫答案,然后回收整理、統(tǒng)計和研究。
2、觀察法
觀察法是指研究者根據(jù)一定的研究目的、研究提綱或觀察表,用自己的感官和輔助工具去直接觀察被研究對象,從而獲得資料的一種方法。科學(xué)的觀察具有目的性和計劃性、系統(tǒng)性和可重復(fù)性。
3、文獻(xiàn)研究法
文獻(xiàn)研究法是根據(jù)一定的研究目的或課題,通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料,從而全面地、正確地了解掌握所要研究問題的一種方法。文獻(xiàn)研究法被廣泛用于各種學(xué)科研究中。
4、跨學(xué)科研究法
運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行綜合研究的方法,也稱“交叉研究法”。科學(xué)發(fā)展運(yùn)動的規(guī)律表明,科學(xué)在高度分化中又高度綜合,形成一個統(tǒng)一的整體。
據(jù)有關(guān)專家統(tǒng)計,現(xiàn)在世界上有2000多種學(xué)科,而學(xué)科分化的趨勢還在加劇,但同時各學(xué)科間的聯(lián)系愈來愈緊密,在語言、方法和某些概念方面,有日益統(tǒng)一化的趨勢。
5、個案研究法
個案研究法是認(rèn)定研究對象中的某一特定對象,加以調(diào)查分析,弄清其特點(diǎn)及其形成過程的一種研究方法。
參考資料來源:搜狗百科——研究方法
應(yīng)用免疫學(xué)的理論、技術(shù)和方法診斷各種疾病和測定免疫狀態(tài)。
在醫(yī)學(xué)上,它是確定疾病的病因和病變部位,或是確定機(jī)體免疫狀態(tài)是否正常的重要方法。此外,還應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)的血跡鑒定、生物化學(xué)的血清成分鑒定和物種進(jìn)化關(guān)系的研究等。
可在體內(nèi)和體外進(jìn)行。從免疫學(xué)的角度免疫診斷可應(yīng)用于:(1)檢查免疫器官和功能發(fā)生改變的疾病:如免疫缺陷病、自身免疫病。
(2)由免疫機(jī)制引起的疾病:如輸血反應(yīng)、移植排斥反應(yīng)。(3)一些內(nèi)分泌性的疾病:從臨床學(xué)的角度來說,免疫診斷可應(yīng)用于檢查傳染性疾病、免疫性疾病、腫瘤和其他臨床各科疾病。
就所檢測的反應(yīng)物免疫診斷大致可以分為兩類,即:(1)免疫血清學(xué)診斷:檢測病人血清或組織內(nèi)有無特異性抗體或特異性抗原。(2)免疫細(xì)胞學(xué)診斷:測定病人細(xì)胞免疫力的有無和強(qiáng)弱。
免疫診斷須體現(xiàn)3項要求:(1)特異性強(qiáng),盡量不出現(xiàn)交叉反應(yīng),不出現(xiàn)假陽性,以保證診斷的準(zhǔn)確性。(2)靈敏度高,能測出微量反應(yīng)物質(zhì)和輕微的異常變化,有利于早期診斷和排除可疑病例。
(3)簡便、快速、安全。
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