細胞融合的方法(細胞融合的基本原理和方法)

1.細胞融合的基本原理和方法

(1)病毒誘導(dǎo)助融

其實， 細胞融合在自然界是存在的， 細胞融合研究首先也是基于自發(fā)的細胞融合。1 9 5 7

年， 岡田善雄意外發(fā)現(xiàn)仙臺病毒（ H vJ ） ， 能誘導(dǎo)懸液中艾氏腹細胞融合。然后H ar ri s 、

K a d a 等用于誘導(dǎo)種間細胞融合， 獲得成功。

(2)化學助融

1 9 7 2 年， 卡爾森首先用硝酸鈉進行煙草兩個種的細胞原生質(zhì)體的融合， 1 9 7 4 年Kao等首先發(fā)現(xiàn)PEG （ 聚乙二醇） 能誘導(dǎo)植物細胞原生質(zhì)體融合產(chǎn)生雜交細胞。1975年P(guān)entecorvo。發(fā)現(xiàn)PE G 亦能幫助哺乳類動物細胞的融合， 1 9 7 6 年D a vi d s o n 更進一步證實這一結(jié)果， 并且認為其具有簡單快速、高效率等優(yōu)點。因而， 75 年之后聚乙二醇就逐漸取代了仙臺病毒。

(3)電融合法

電融合法是70 年代未期和80 年代初期發(fā)展起來的一種新的細胞融合方法。Senda (1970)

首先應(yīng)用電脈沖， 通過微電極在顯微鏡下使植物細胞融合， 奠定電融合技術(shù)基礎(chǔ)

(4)激光誘導(dǎo)卵細胞融合

激光誘導(dǎo)卵細胞融合是最新的細胞融合方法。該法為張聞迪（ 1 9 8 8 ） 等人首先應(yīng)用。他們利用激光微束的單色性、高功率密度、短脈寬和極小的作用范圍等特點。對泥鰍受精卵進行

融合試驗， 獲得成功， 且融合后的細胞可存活發(fā)育， 經(jīng)卵裂期、囊胚期、原腸期、孵化期、

直至幼魚。整個過程可通過顯微鏡觀察， 還可同時由電視攝象監(jiān)視器觀察和進行照相記錄

2.4、誘導(dǎo)細胞融合的方法有哪些

(1)物理融合的機制

20世紀80年代發(fā)明了電融合技術(shù)。此方法是先將兩種原生質(zhì)體以適當?shù)谋壤瞥杉毎麘乙海瑢⑵涞稳腚娙诤闲∈抑校o小室兩極以交變電流，使原生質(zhì)體沿電場方向聚集成串珠狀，接著給以瞬間高強度的電脈沖，使原生質(zhì)體膜產(chǎn)生局部破損而融合。

(2)化學融合的機制

現(xiàn)通常使用聚乙二醇（PEG）作為融合劑。PEG可以破環(huán)細胞間相互排斥的表面作用力，從而使相鄰細胞聚集而促進融合。另外，化學融合方法還有高pH高Ca2+法，其基本原理是中和原生質(zhì)體表面所帶電荷，使原生質(zhì)體的質(zhì)膜緊密接觸，從而有利于質(zhì)膜的接觸融合。

(3)滅火病毒誘導(dǎo)的細胞融合的機制

此方法適用于動物細胞的融合。通常使用滅火的仙臺病毒。利用滅火的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。在誘導(dǎo)細胞發(fā)生融合前，必須先用紫外線將病毒滅火，再稀釋到一定濃度后加入到細胞懸液中誘導(dǎo)細胞融合。

3.植物細胞融合有哪些方法

細胞膜打開。

化學和物理方法可造成膜脂分子排列的改變： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用， 但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)

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這里的病毒肯定不會死亡的， 細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布， 細胞發(fā)生融合，在恢復(fù)過程中便可誘導(dǎo)相接觸的細胞發(fā)生融合.，去掉作用因素之后.

滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力.，稱誘發(fā)融合..只是滅活， 但是保留了他能夠使細胞融合的特性.

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異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合，質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)滅活病毒誘導(dǎo)細胞融合的原理是， 使細胞相互凝聚

4.細胞融合的融合方法

同種細胞在培養(yǎng)時2個靠在一起的細胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合；異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合，稱誘發(fā)融合。

仙臺病毒法融合

①兩種細胞在一起培養(yǎng)，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細胞

膜上。并使兩細胞相互凝聚；

②在37℃中，病毒與細胞膜發(fā)生反應(yīng)，細胞膜受到破環(huán)，此時需

要Ca2+和Mg2+，最適PH為8.0一8.2;

②細胞膜連接部穿通，周邊連接部修復(fù)，此時需Ca2+和ATP;

④融合成巨大細胞，仍需ATP。

聚乙二醇（PEG）法

聚乙二醇（PEG）結(jié)構(gòu)為：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后，與溫熱的Engle氏液混合。一般選用分子量為4,000，常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2（用10%NaHCO3調(diào)整），分子量小的PEG，融合效應(yīng)差，又有毒性，分子量過大，則粘性太大，不易操作。

電融合法

在直流電脈沖的誘導(dǎo)下，細胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進而質(zhì)膜開始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。

優(yōu)點：融合率高、重復(fù)性強、對細胞傷害小；

裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程；

免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程、誘導(dǎo)過程可控性強。

離心振動

物理方法之一，使用離心機等機器實現(xiàn)細胞之間的融合。